血管生成在胃腸道惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、目的：檢測胃腸道癌組織中血管生成素-2(Angiogenin-2,Ang-2)及其特異性酪氨酸激酶受體-2(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains,Tie-2)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-2(vascular endothelial growth factor receptor-2，VEGFR-2)的表達(dá)，

2、分析它們與腫瘤臨床病理特征、腫瘤微血管密度(Microvessel Density,MVD)及預(yù)后的關(guān)系，探討其是否可以作為預(yù)測胃腸道癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和判斷預(yù)后的分子生物學(xué)標(biāo)志物。
　　 方法：采用免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)技術(shù)檢測2002年1月至2008年11月于寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院住院治療的118例胃腸道癌患者(胃癌64例，大腸癌54例)癌組織、40例癌旁正常組織(距癌組織≥5cm)及40例胃

3、腸良性疾病患者病變組織中Ang-2、Tie-2、VEGFR-2的表達(dá)；CD34標(biāo)記微血管。采用蛋白免疫印跡(western blot)技術(shù)檢測2008年5月至2008年11月于寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院住院行手術(shù)治療的76例胃腸道癌患者(胃癌40例，大腸癌36例)癌組織、40例癌旁正常組織(距癌組織≥5cm)及40例胃腸良性疾病患者病變組織中Ang-2、Tie-2、VEGFR-2的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)免疫組化實驗

4、部分：1)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌組織中的陽性表達(dá)率分別為74.58[％]、69.49[％]和61.02[％]；在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率分別為25.00[％]、17.50[％]和17.50[％]；在胃腸良性病變組織中的陽性表達(dá)率分別為35.00[％]、32.50[％]和32.50[％]；三者在癌組織中的表達(dá)與癌旁正常組織及胃腸良性病變組織中的表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；癌旁正常組織和良性病變組織中的表達(dá)

5、無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。2)Ang-2表達(dá)與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(guān)(P<0.05)；Tie-2表達(dá)與胃腸道癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(guān)(P<0.05)；VEGFR-2表達(dá)與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(guān)(P<0.05)；logistic多因素回歸分析顯示，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和臨床分期均與Ang-2、Tie-2 及VEGFR-2的表達(dá)相關(guān)(P<0.05)；浸潤深度與Ang-2的表達(dá)相

6、關(guān)(P<0.05)。3)根治術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者和未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者Ang-2、Tie-2和VEGFR-2的表達(dá)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。4)Kaplan-Meier生存分析結(jié)果表明：Ang-2、Tie-2和VEGFR-2表達(dá)與總生存期相關(guān)，表達(dá)陰性者5年生存率明顯高于陽性表達(dá)者(P<0.05)。5)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2表達(dá)與患者術(shù)后5年內(nèi)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，并與患者總生存期相關(guān)，陰性表達(dá)者5年生存率

7、明顯高于陽性表達(dá)者(P<0.05)。6)兩個或三個因子共表達(dá)陽性率明顯高于單個因子陽性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義﹙P<0.05)，三者均陰性及單個因子表達(dá)陽性者5年生存率均較兩個或三個因子共表達(dá)者高﹙P<0.05)。7)Ang-2在胃腸道癌組織中的表達(dá)與CEA、CA199呈正相關(guān)(P<0.05)；Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌組織中的表達(dá)與CEA呈正相關(guān)(P<0.05)。在CEA陰性表達(dá)的胃腸癌患者中Ang-2、Tie-2、VEGF

8、R-2陽性表達(dá)率分別為59.09[％](13/22)、50.00[％](11/22)、40.91[％](9/22)；在CA199陰性表達(dá)的胃腸癌患者中Ang-2、Tie-2、VEGFR-2陽性表達(dá)率分別為64.29[％](18/28)、60.71[％](17/28)、50.00[％](14/28)。8)Ang-2、Tie-2、VEGFR-2在胃腸道癌組織中的陽性表達(dá)均與MVD呈正相關(guān)(P<0.05)。9)Ang-2、Tie-2和VEGF

9、R-2在胃腸道癌中的表達(dá)兩兩比較均呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　 (2)Western blot實驗部分：1)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌組織中的陽性表達(dá)率分別為76.32[％]、72.37[％]和63.16[％]；在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率分別為30.000[％]、22.50[％]和22.50[％]；在胃腸良性病變組織中的陽性表達(dá)率分別為40.00[％]、37.500[％]和32.50[％]，三者在癌組

10、織中的表達(dá)與癌旁正常組織及胃腸良性病變組織中的表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；癌旁正常組織和良性病變組織中的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。2)Ang-2表達(dá)與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(guān)(P<0.05)；Tie-2表達(dá)與胃腸道癌臨床分期呈正相關(guān)(P<0.05)；VEGFR-2表達(dá)與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(guān)(P<0.05)；logistic多因素回歸分析顯示，浸潤深度和臨床分期與Ang-2的表

11、達(dá)相關(guān)(P<0.01)；臨床分期與Tie-2的表達(dá)相關(guān)(P<0.01)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期與VEGFR-2的表達(dá)相關(guān)(P<0.05)。3)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌中的表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　 (3)免疫組化及Western blot檢測結(jié)果：兩種方法同時檢測了Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌組織中的表達(dá)，兩種檢測方法Kappa值分別為0.756、0.638、0.672；一致率

12、分別為91.83[％]、84.48[％]、86.89[％]。
　　 結(jié)論：
　　 (1)胃腸道癌組織中存在Ang-2、Tie-2和VEGFR-2蛋白的表達(dá)。
　　 (2)Ang-2表達(dá)與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期、MVD和根治術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，并與胃腸道癌的5年生存率相關(guān)，表明Ang-2與胃腸道癌的生物學(xué)行為密切相關(guān)，可以作為預(yù)測胃腸道癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和判斷預(yù)后的分子生物學(xué)標(biāo)志物之一

13、。
　　 (3)Tie-2表達(dá)與胃腸道癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期、MVD和根治術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，并與胃腸道癌的5年生存率相關(guān)，表明Tie-2參與了胃腸道癌血管生成的調(diào)節(jié)，可以作為預(yù)測胃腸道癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和判斷預(yù)后的分子生物學(xué)標(biāo)志物之一。
　　 (4)VEGFR-2表達(dá)與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期、MVD和根治術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，并與胃腸道癌的5年生存率相關(guān)，表明VEGFR-2參與了胃腸道

14、癌血管生成的調(diào)節(jié)，可以作為預(yù)測胃腸道癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和判斷預(yù)后的分子生物學(xué)標(biāo)志物之一。
　　 (5)胃腸道癌組織中存在Ang-2、Tie-2和VEGFR-2三種蛋白的單獨表達(dá)和共表達(dá)，以共表達(dá)為主，并與患者的5年生存率相關(guān)，表明聯(lián)合檢測多種血管生成因子可能會提高侵襲轉(zhuǎn)移的檢出率，更能反應(yīng)患者的預(yù)后。
　　 (6)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2的表達(dá)與患者術(shù)后發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，并與患者5年生存率相關(guān)，表明三者在胃腸道

15、癌發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的早期階段即發(fā)揮了作用，可以作為預(yù)測胃腸道癌早期發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)標(biāo)志物。
　　 (7)Ang-2表達(dá)與CEA、CA199呈正相關(guān)，Tie-2和VEGFR-2表達(dá)與CEA呈正相關(guān)，CEA、CA199表達(dá)陰性者均存在Ang-2、Tie-2和VEGFR-2陽性表達(dá)，說明對CEA、CA199陰性表達(dá)者檢測Ang-2、Tie-2、VEGFR-2可能會提高早期侵襲轉(zhuǎn)移的檢出率。
　　 (8)Ang-2、Tie-