德國小蠊抗藥性的生物學(xué)標(biāo)志及快速生化檢測方法研究.pdf

1、德國小蠊可攜帶大量病原體，導(dǎo)致多種蟲媒傳染病的流行，對人體健康危害極大。長期大量不合理的濫用各種殺蟲劑，使得德國小蠊抗藥性問題日趨突出，抗藥性已成為制約德國小蠊化學(xué)防制效果的一個(gè)主要因素。目前病媒昆蟲抗藥性測定方法以生物測定法為主。實(shí)際應(yīng)用情況表明，現(xiàn)有的抗性檢測方法，無論是測定KT50還是測定LD50或LC50，都不適合早期抗性的檢測。因?yàn)楫?dāng)抗性被證實(shí)時(shí)，抗性頻率已經(jīng)很高。國內(nèi)外研究生化檢測方法代替生物測定法測定蚊、蠅抗藥性已取得一定

2、成效。若能找出德國小蠊抗藥性的生物學(xué)標(biāo)志，進(jìn)而建立德國小蠊抗藥性快速生化檢測方法，則可以提高抗性檢測的速度、靈敏度及準(zhǔn)確度，對延緩抗性發(fā)展、減少殺蟲劑對環(huán)境的污染及制定合理有效的抗性治理措施都有重要的意義。 本研究以代謝抗性和靶標(biāo)抗性產(chǎn)生的生化機(jī)制為基礎(chǔ)，研究不同殺蟲劑施用濃度、施藥周期、抗性水平與德國小蠊體內(nèi)相關(guān)酶活性的關(guān)系，從而分析哪些靶標(biāo)酶和代謝酶可作為某種殺蟲劑抗藥性的生物學(xué)標(biāo)志，建立德國小蠊抗藥性與生物學(xué)標(biāo)志的相關(guān)方程

3、。 1.DDVP及高效氯氰菊酯施藥濃度對德國小蠊相關(guān)代謝酶活性的影響 1.1DDVP施藥濃度對德國小蠊相關(guān)代謝酶活性的影響。結(jié)果顯示堿性磷酸酯酶在DDVP施藥濃度≤0.004％時(shí)，其活性隨施藥濃度增加逐漸降低，但施藥組與對照組相比，無顯著性差異：隨DDVP施藥濃度增加，德國小蠊谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性受抑制程度逐漸增加，在DDVP施藥濃度為0.002％-0.004％之間時(shí)，施藥組與對照組相比，酶活性有顯著性差異；P450-

4、O脫甲基酶活性隨施藥濃度增加而降低，在DDVP施藥濃度為0.002％-0.004％時(shí)，施藥組與對照組相比，酶活性有顯著性差異。結(jié)果初步說明谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和P450-O脫甲基酶是DDVP的主要代謝酶，而堿性磷酸酯酶是否是DDVP的代謝酶還需要進(jìn)一步研究。 1.2高效氯氰菊酯施藥濃度對德國小蠊相關(guān)代謝酶活性的影響。結(jié)果顯示堿性磷酸酯酶活性在高效氯氰菊酯施藥濃度≤0.0004％，施藥組與對照組相比，差異無顯著性；谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶

5、活性隨施藥濃度增加而降低，在高效氰氰菊酯施藥濃度為0.0003％和0.0004％時(shí)，施藥組與對照組相比，酶活性有顯著性差異：P450-O脫甲基酶活性施藥濃度增加而降低，在高效氯氰菊酯施藥濃度為0.0002％-0.0004％時(shí)，施藥組與對照組相比，酶活性有顯著性差異。結(jié)果初步說明谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶和P450-O脫甲基酶可能是高效氯氰菊酯的主要代謝酶，而堿性磷酸酯酶是否是高效氯氰菊酯的主要代謝酶還有待進(jìn)一步研究。 2.DDVP施藥周

6、期對德國小蠊相關(guān)代謝酶活性的影響 2.1DDVP施藥周期對堿性磷酸酯酶活性的影響。DDVP施藥周期在18天以下時(shí)，各施藥組堿性磷酸酯酶活性與對照組相比，差異無顯著性，進(jìn)一步說明堿性磷酸酯酶可能不是DDVP的主要代謝酶。 2.2DDVP施藥周期對谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性的影響。施藥組谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性隨施藥周期的延長先下降后又慢慢回升。進(jìn)一步說明谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶是DDVP的主要代謝酶。德國小蠊長期接觸低劑量DDVP導(dǎo)致

7、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性的回升可能是其對DDVP產(chǎn)生抗藥性的原因之一。 2.3DDVP施藥周期對P450-O脫甲基酶活性的影響。施藥組P450-O脫甲基酶活性與對照組相比，先升高后漸下降而后又逐漸回升。說明DDVP對德國小蠊P450O-脫甲基酶有誘導(dǎo)性，但誘導(dǎo)的時(shí)間很短。長期低劑量多次接觸DDVP是否會引起德國小蠊P450O-脫甲基酶活性持續(xù)增加，從而造成對殺蟲劑代謝增強(qiáng)而引起抗藥性還需要進(jìn)一步研究。 3.德國小蠊抗藥性快

8、速生化檢測方法的研究 3.1德國小蠊DDVP不同抗性品系與相關(guān)靶標(biāo)酶和代謝酶酶活性的關(guān)系 分析實(shí)驗(yàn)室培育的DDVP不同抗性品系的德國小蠊抗性水平與相關(guān)靶標(biāo)酶和代謝酶酶活性的關(guān)系，結(jié)果顯示DDVP不同抗性水平與AChE抑制率密切相關(guān)?？剐云废?-NA酯酶、酸性磷酸酯酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的活性與敏感品系相比，差異也存在有顯著性。提示AChE抑制率、1-NA酯酶、酸性磷酸酯酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性可以作為德國小蠊DDVP抗

9、性程度的生物學(xué)標(biāo)志。在此基礎(chǔ)上，初步建立了DDVP抗性生物學(xué)標(biāo)志與抗性系數(shù)的相關(guān)方程。 3.2德國小蠊高效氯氰菊酯不同抗性品系與相關(guān)靶標(biāo)酶和代謝酶酶活性的關(guān)系 分析實(shí)驗(yàn)室培育的高效氯氰菊酯不同抗性品系的德國小蠊抗性水平與相關(guān)靶標(biāo)酶和代謝酶酶活性的關(guān)系，結(jié)果顯示高效氯氰菊酯不同抗性水平與AChE抑制率的差異有顯著性?？剐云废倒入赘孰腟-轉(zhuǎn)移酶活性與敏感品系相比，差異無顯著性。提示AChE抑制率可以作為德國小蠊高效氯氰菊酯抗