卵巢癌患者血液循環(huán)中無(wú)細(xì)胞DNA的含量分析及其臨床意義.pdf

1、目的：卵巢上皮性癌(EOC,以下簡(jiǎn)稱卵巢癌)是婦科惡性腫瘤領(lǐng)域內(nèi)死亡率最高的疾病，5年生存率長(zhǎng)期徘徊在30％左右。卵巢癌起病隱匿，早期診斷困難，75％的患者就診時(shí)己到臨床晚期，晚期患者的5年生存率僅20％左右，而早期則高達(dá)85％-90％。目前臨床常用卵巢癌診斷和監(jiān)測(cè)指標(biāo)是血清CA125，但由于CA125人有一定的局限性且特異性不高，很多生理狀態(tài)和良性疾病也有所升高，所以長(zhǎng)期以來(lái)臨床上亟需一個(gè)更靈敏的卵巢癌診斷和病情監(jiān)測(cè)血清學(xué)指標(biāo)。近年來(lái)

2、很多學(xué)者致力于卵巢癌早期診斷的研究，但至今沒(méi)有找到血清CA-125之外可應(yīng)用于臨床的更有效血清學(xué)指標(biāo)。目前循環(huán)無(wú)細(xì)胞DNA (cfDNA)的研究報(bào)道越來(lái)越多，cfDNA是存在于血清或血漿中的碎裂的核酸片段，可能來(lái)源于程序性死亡細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞壞死所釋放的核酸片段，關(guān)于其在臨床各種癌癥的研究在八十年代后期重新受到人們的關(guān)注。近來(lái)幾項(xiàng)研究也表明在頭頸癌、肺癌和結(jié)腸癌患者的血清中檢測(cè)腫瘤特異性遺傳基因改變是有可能的。重要的是，腫瘤細(xì)胞特異性DN

3、A改變不僅存在于癌癥轉(zhuǎn)移患者的血清中而且也存在于原發(fā)的癌癥早期患者的血清中。有報(bào)道使用ALU247/AL115的比值來(lái)代表乳腺癌患者血清中的腫瘤相關(guān)cfDNA，并證明其與乳腺癌的疾病進(jìn)展和瘤負(fù)荷呈正相關(guān)，ALU115代表患者血清中cfDNA的總量，ALU247代表患者血清中腫瘤相關(guān)cfDNA的總量。本試驗(yàn)采用半定量PCR的方法測(cè)量卵巢癌患者血清中無(wú)細(xì)胞DNA中的腫瘤相關(guān)DNA(ALU247/ALU115)及CA-125基因片段的水平，探

4、討其與卵巢癌臨床分期，病理學(xué)類(lèi)型和疾病進(jìn)展的關(guān)系。另外還討論卵巢癌患者血清無(wú)細(xì)胞CA125 DNA(CA125-cfDNA，CA125的基因)與CA125在卵巢癌病情監(jiān)測(cè)中的相關(guān)性，為卵巢癌臨床診斷及病情監(jiān)測(cè)提供了一個(gè)新的標(biāo)記物。 方法：卵巢癌及卵巢良性腫瘤的標(biāo)本來(lái)源于2005 年 12月～2006年12月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院婦科住院患者，共計(jì)卵巢癌病例48例，良性卵巢上皮性腫瘤16例，正常健康對(duì)照12例。病例均經(jīng)組織病理和臨

5、床手術(shù)確定，病例分期標(biāo)準(zhǔn)采用 FIG02000年修訂的手術(shù)病理分期。其中宮內(nèi)膜樣癌16例，漿液性囊腺癌26例，粘液性囊腺癌6例，平均年齡50.17歲。良性上皮性腫瘤組16例來(lái)自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院婦科同期住院的卵巢良性腫瘤患者，其中漿液性囊性腺瘤11例，粘液性囊腺瘤5例，平均年齡為48歲。健康對(duì)照組12例其中6例來(lái)自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院婦科同期住院的子宮脫垂患者，6例來(lái)自同一所醫(yī)院的婦科大夫，健康對(duì)照組平均年齡為45歲。血清標(biāo)本采集：卵

6、巢癌患者的血清標(biāo)本包括術(shù)前、術(shù)后三天和23例術(shù)后化療二療程后卵巢癌患者的血清，血清標(biāo)本均是晨起空腹，抽取5ml靜脈血，置入含促凝劑試管中，放置4℃冰箱在六小時(shí)內(nèi)處理。腹水標(biāo)本的采集：收集了上述卵巢癌患者中26例術(shù)前未化療的腹水標(biāo)本，取自開(kāi)腹后打開(kāi)腹膜一小口腹腔探查前用20ml無(wú)菌注射器抽吸腹水20ml，取后立即處理。 用QIAGEN 的微量提取試劑盒提取血清中游離的DNA片段后用半定量PCR擴(kuò)增ALU重復(fù)片段、β-actin，

7、CA125DNA片段，血清腫瘤相關(guān)cfDNA的量用ALU247/ALU115來(lái)表示，CA125-cfDNA 的相對(duì)水平用CA-125 DNA/β-actin來(lái)表示。試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行組組間和單因素多樣本均數(shù)比較的方差分析 t 檢驗(yàn)和spearman相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)論： 1.卵巢癌患者腫瘤相關(guān)長(zhǎng)片段 cfDNA 術(shù)前的值明顯高于卵巢良性腫瘤患者和健康對(duì)照，而健康對(duì)照和良性腫瘤的組間比較沒(méi)

8、有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示這腫瘤相關(guān)長(zhǎng)片段cfDNA可以用于卵巢上皮性腫瘤良惡性鑒別診斷。 2.卵巢癌患者腫瘤相關(guān)長(zhǎng)片段cfDNA術(shù)前或術(shù)后的值均高于化療二程后和健康對(duì)照的值有顯著差異，組間兩兩比較均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示腫瘤相關(guān)長(zhǎng)片段 cfDNA 與瘤負(fù)荷呈正相關(guān)，可以作為卵巢癌的病情監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。 3.卵巢癌患者腫瘤相關(guān)長(zhǎng)片段cfDN Ⅲ-Ⅳ期的值明顯高于Ⅰ-Ⅱ期，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯示有顯著性差異，而不同病理類(lèi)型間的組間兩兩

9、比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示腫瘤相關(guān)長(zhǎng)片段 cfDNA可以用于卵巢癌的早期診斷和病情監(jiān)測(cè)。 4.CA125-cfDNA與CA125的術(shù)前及二程化療后的值做相關(guān)性比較結(jié)果顯示兩個(gè)指標(biāo)之間呈正相關(guān)關(guān)系，但CA-125在粘液性卵巢癌中的表達(dá)往往趨于正常值，然而CA125-cfDNA在不同的病理學(xué)類(lèi)型之間的組間兩兩比較沒(méi)有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在二程化療后明顯高于健康對(duì)照的值，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，所以CA125-cfDNA可以作為卵巢癌尤其卵巢