乙型肝炎病毒隱匿型感染的發(fā)生率及其與隱源性肝細(xì)胞癌的關(guān)系.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)擬應(yīng)用乙型肝炎病毒核糖核酸血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)，研究不同肝病背景的人群中HBV隱匿型感染的發(fā)生率，觀察HBV隱匿性感染與隱源性肝硬變及HBsAg陰性肝癌的關(guān)系。 自健康獻(xiàn)血者與非肝病的住院患者、HBsAg陰性的隱源性肝病患者(包括肝硬化、肝癌、丙肝與病因不清肝炎)血清中采用羅氏公司高純度病毒核酸提取試劑盒提取血清病毒核酸；經(jīng)PCR擴(kuò)增HBxDNA；應(yīng)用單管RT-PCR試劑盒，分別以txs+/txas5-和txs2+/txas5-

2、為引物，經(jīng)一步法擴(kuò)增全長(zhǎng)型RNA(Full-lengthRNA，fRNA)和頓挫型RNA(TruncatedRNA，trRNA)。PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳顯示結(jié)果，Southern-blotting驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。 研究結(jié)果表明： l、隱匿型HBV感染在健康獻(xiàn)血員中的檢出率為9％，在HBsAg陰性肝硬化、肝癌、丙肝以及不明原因肝炎中的檢出率分別為：52.5％、47％、74％、61％。在HBVDNA、fRNA、

3、trRNA三個(gè)指標(biāo)的檢出中，trRNA的相對(duì)應(yīng)檢出率分別為7％和35％、27％、50％、52％，檢出率均較相應(yīng)的HBXDNA、fRNA檢出率高，存在顯著差異。特別是在乙肝五項(xiàng)全部陰性樣本中單獨(dú)檢出trRNA較高，而且是唯一可以檢出的指標(biāo)，更有意義。 2、應(yīng)用流行病學(xué)的病例對(duì)照研究方法[19]，以年齡、性別、生存地區(qū)等相匹配非肝病住院患者為對(duì)照，把檢測(cè)到的HBVXDNA作為隱匿型HBV感染的暴露因素，分別統(tǒng)計(jì)分析隱源性肝硬化、肝癌

4、患者組與對(duì)照組暴露因素的比數(shù)比(OR)。結(jié)果顯示：隱匿型乙肝感染在隱源性肝癌、肝硬化中比數(shù)比分別是OR=8.1429，(95％CI=2.98----22.3)和OR=4.75(95％CI=1.62----13.9)，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，說明隱匿型乙肝感染可能是部分隱源性肝癌、肝硬化的病因。 研究結(jié)論： 1.HBVRNA的檢測(cè)提高了HBV隱匿型感染的診斷率；在HBsAg陰性各種肝病患者血清中，HBVRNA檢出率明顯高于

5、相應(yīng)DNA的檢出率，部分樣本中僅能檢測(cè)到病毒RNA。提示在這種病毒低復(fù)制水平的感染狀態(tài)下，trRNA是唯一的病毒標(biāo)志物。 2.在高流行區(qū)，HBV隱匿型感染的發(fā)生率提高，甚至在高流行區(qū)出生并長(zhǎng)期生活的所謂“健康”人群中的部分個(gè)體也是HBV隱匿型感染者。 3.隱匿型HBV感染可能與HBsAg陰性肝癌、肝硬化的發(fā)生有關(guān)。 4.基于更大樣本量的前瞻性研究將進(jìn)一步明確隱匿型感染、特別是trRNA單獨(dú)陽性的特殊隱匿型感染狀態(tài)