五倍子對(duì)鯉魚細(xì)胞色素P4503A的影響和藥效研究.pdf

1、五倍子別名文蛤、百蟲倉、木樹子等，是倍蚜科昆蟲角倍蚜或蛋倍蚜寄生在漆樹科植物鹽膚木等樹上形成的干燥蟲癭。五倍子的主要有效成分是鞣酸，含量最高可達(dá)70﹪，還含有沒食子酸等其他有效成分，對(duì)革蘭氏陽性和陰性菌均有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用，藥理和臨床研究證明其具有抗菌解毒、收斂止血、斂肺降火、祛腐生新、澀腸止瀉等作用。五倍子盛產(chǎn)于我國，生長在溫暖濕潤的山區(qū)和丘陵，產(chǎn)量豐富，是一種廉價(jià)、有效的中藥資源。生產(chǎn)中，五倍子被用于水產(chǎn)動(dòng)物疾病的治療，但關(guān)于五

2、倍子對(duì)體內(nèi)重要的藥物代謝酶細(xì)胞色素P450的影響及其可能引起的藥物聯(lián)合使用時(shí)相互作用的研究，以及對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖中危害嚴(yán)重的細(xì)菌性敗血癥的藥效研究尚未見報(bào)道。 本論文建立了鯉魚細(xì)胞色素P4503A酶活性的檢測(cè)方法，比較了鯉魚不同組織中該酶活性的差異，研究了五倍子對(duì)鯉魚CYP3A酶活性的影響，進(jìn)行了五倍子對(duì)鯉魚細(xì)菌性敗血癥的預(yù)防治療效果以及對(duì)水產(chǎn)常見致病菌的體外抑菌作用的試驗(yàn)。 1鯉魚CYP3A酶活性檢測(cè)方法和組織分布比較的研究

3、采用差速離心法制備組織微粒體，建立鯉魚細(xì)胞色素P4503A酶活性的檢測(cè)方法，并對(duì)鯉魚不同組織中CYP3A酶的活性進(jìn)行測(cè)定比較。試驗(yàn)結(jié)果：應(yīng)用紫外分光光度計(jì)，以紅霉素為探針?biāo)幬?，Nash顯色法測(cè)定鯉魚細(xì)胞色素P4503A酶活性方法靈敏可靠。鯉魚的肝臟、腎臟、腸道、腦、鰓、性腺組織均可檢測(cè)出CYP3A酶活性；各組織CYP3A活性不同，肝臟中最高，是其他組織的5至8倍，腎臟、腸道、腦、鰓次之，性腺其次。 2五倍子對(duì)鯉魚肝微粒體CYP3

4、A酶活性的影響探討五倍子對(duì)鯉魚肝臟CYP3A酶活性的影響。水煎法制備五倍子水提取液，以高(生藥40mg/kg·d)、中(25mg/kg·d)、低(10mg/kg·d)3個(gè)劑量濃度對(duì)鯉魚注射給藥，第5d和10d制備各組肝微粒體測(cè)定P4503A活性。試驗(yàn)結(jié)果：給藥5d，高濃度組和中濃度組CYP3A活性較空白組降低，其中高濃度組降低顯著，但低濃度組無變化；第10d，高濃度組和中濃度組CYP3A活性較空白組均呈顯著降低，低濃度組呈不顯著降低。對(duì)

5、于同一濃度組，第10d活性測(cè)定較第5d均呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。同一時(shí)間的測(cè)定中，活性均呈現(xiàn)高濃度組＜中濃度組＜低濃度組。結(jié)果表明，五倍子能明顯抑制鯉魚肝微粒體CYP3A活性；五倍子的抑制作用與給藥劑量和藥物作用時(shí)間呈相關(guān)性，給藥濃度越高，抑制作用越大；給藥時(shí)間延長，抑制作用增強(qiáng)。 3五倍子對(duì)三種水產(chǎn)致病菌的體外抑菌和急性毒性試驗(yàn)采用試管兩倍稀釋法測(cè)定五倍子水煎煮液對(duì)三種魚類常見致病菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)，并進(jìn)

6、行五倍子對(duì)鯉魚的急性毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果：五倍子煎煮液對(duì)溫和氣單胞菌、愛德華氏菌、柱狀屈撓桿菌的最小抑菌濃度分別為6.250mg/mL、3.125mg/mL、0.781mg/mL；最小殺菌濃度分別為12.500mg/mL、12.500mg/mL、3.125mg/mL。五倍子對(duì)鯉魚的48h半致死濃度為1.1015g/kg，安全濃度為0.1102g/kg。結(jié)果顯示，五倍子具有較強(qiáng)的抑菌殺菌效果，在安全濃度范圍內(nèi)合理給藥，安全有效。 4

7、五倍子對(duì)鯉魚細(xì)菌性敗血癥的藥效研究以0.5﹪和1.0﹪五倍子藥餌飼喂鯉魚，通過肝臟和血液指標(biāo)的測(cè)定，以及攻毒結(jié)果，研究五倍子對(duì)鯉魚細(xì)菌性敗血癥的藥效。試驗(yàn)結(jié)果：攻毒前飼喂藥餌16d，防治組肝臟酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性升高(P＜0.05)；攻毒并給藥14d，防治組和治療組血清肌酐、尿酸、尿素氮含量，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶活性均由第8d高于空白組(P＜0.05)降低到正常值或與之基本接近(P＞0.05)；攻毒結(jié)果，防治組和治療組死亡率較對(duì)