貓爪草多糖的研究.pdf

1、中藥貓爪草(RanunculusternatusThunb.)始載于《中草藥手冊(cè)》，系毛莨科植物小毛莨的塊根，具有解毒、化痰散結(jié)的功能，主治瘰疬、結(jié)核、咽炎等。貓爪草藥材主產(chǎn)于河南省信陽(yáng)的駐馬店地區(qū)。多糖具有豐富的藥理活性，且無(wú)毒副作用，已廣泛應(yīng)用于臨床及保健品市場(chǎng)。有關(guān)貓爪草中的化學(xué)成分已有不少報(bào)道，但對(duì)其中的多糖成分研究極少。 本論文包括綜述和研究報(bào)告兩部分內(nèi)容。 第一部分：綜述 1.貓爪草研究概況

2、貓爪草的研究概況涉及貓爪草的化學(xué)成分的研究進(jìn)展和貓爪草藥理的研究現(xiàn)狀。貓爪草中化學(xué)成分的內(nèi)容涉及揮發(fā)油、內(nèi)酯類(lèi)、甾醇類(lèi)成分、不飽和脂肪酸、無(wú)機(jī)元素和多糖等多種。貓爪草具有廣泛的藥理活性，其藥理研究涉及治療肺結(jié)核、頸淋巴結(jié)核、咽喉炎、淋巴癌、甲狀腺腫瘤及乳腺腫瘤等疾病。 2.多糖的研究進(jìn)展 多糖的研究進(jìn)展部分涉及多糖的生物活性研究現(xiàn)狀、多糖的研究方法、多糖的研究應(yīng)用及其發(fā)展方向。 第二部分：研究報(bào)告 包括四

3、個(gè)研究報(bào)告：貓爪草多糖的提取及含量測(cè)定；貓爪草多糖的分離、純化及其理化性質(zhì)的研究；貓爪草多糖的初步結(jié)構(gòu)鑒定；貓爪草多糖的抗氧化活性研究。 首先，采用石油醚回流脫脂，熱水回流提取，經(jīng)80％乙醇沉淀得水溶性多糖，多糖復(fù)溶后，透析除去小分子化合物后以80％乙醇沉淀，沉淀經(jīng)95％乙醇，無(wú)水乙醇，丙酮，乙醚反復(fù)洗滌，干燥得貓爪草多糖半純品RTP(part-pureproductofpolysaccharideofRanunculuster

4、natusThunb.)。 使用o-T試劑法測(cè)定貓爪草中多糖的含量，UV法測(cè)定了蛋白含量。結(jié)果表明葡萄糖在0.2-1.0mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=0.782x+0.00443(r=0.997，n=9)，牛血清蛋白在0.05-1.5mg·mL-1范圍內(nèi)線性良好，其標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.2964x+0.027(r=0.998，n=6)。結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，o-T試劑法測(cè)多糖含量，不僅可以測(cè)總糖的含量，還同時(shí)可以測(cè)定還原糖的含

5、量，較其他方法操作簡(jiǎn)單，不必沉淀蛋白質(zhì)，不受還原性物質(zhì)干擾。而UV法測(cè)定蛋白含量簡(jiǎn)單、靈敏、快速、不消耗樣品、低濃度鹽類(lèi)不干擾測(cè)定。多糖與蛋白含量可以同時(shí)得出而互相不影響。 其次，利用氨基柱和DEAE-纖維素離子交換柱層析貓爪草多糖半純品(RTP)進(jìn)行了分級(jí)純化。氨基柱水洗脫分離得到RTP-1，DEAE-纖維素柱依次用水、0.07、0.1、0.5mol·L-1NaCl和0.1mol·L-1NaOH梯度洗脫得二種級(jí)分，即水洗級(jí)分(

6、RTP-2)、0.07mol·L-1NaCl洗脫級(jí)分(RTP-3)。三種多糖級(jí)分分別經(jīng)紫外光譜和高效凝膠滲透色譜進(jìn)行純度鑒定，都是均一的多糖組分。 再次，采用高效凝膠滲透色譜測(cè)得三種貓爪草多糖級(jí)分的分子量分別為8805，9796，23154。 氣相色譜及氣質(zhì)色譜分析可知，RTP-1主要由葡萄糖組成；RTP-2由D-木糖、葡萄糖組成；RTP-3由D-木糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖組成，后兩種多糖為雜多糖。經(jīng)IR和1HNMR分析

7、可知RTP-1、RTP-2、RTP-3均為α-糖苷鍵的吡喃環(huán)多糖化合物，13CNMR分析得到同樣的結(jié)果。 最后，抗氧化活性實(shí)驗(yàn)主要研究了貓爪草多糖三種精制多糖RTP-1、RTP-2、RTP-3的體外抗氧化活性。(1)測(cè)定貓爪草多糖對(duì)小鼠肝勻漿、腎勻漿、心勻漿、腦勻漿中MDA生成的影響；(2)用分光光度法測(cè)定貓爪草多糖對(duì)H2O2誘導(dǎo)小鼠紅細(xì)胞溶血；(3)用分光光度法測(cè)定貓爪草多糖對(duì)小鼠肝線粒體中MDA生成的影響及Fe2+-VC誘導(dǎo)