TSC2基因和RB基因在血管平滑肌細胞中的協(xié)同表達及意義.pdf

1、目的：
　　 研究TSC2基因與RB基因在不同表型的血管平滑肌細胞(VSMC)中的表達情況,探討VSMC的表型是否與RB基因及TSC2基因的協(xié)同表達具有相關(guān)性。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)大鼠主動脈血管平滑肌細胞,并用血管平滑肌特異性抗體α-SM-actin進行免疫熒光鑒定;實驗選用第3-8代細胞。待細胞長至70%融合時,給予無血清培養(yǎng)基同步化細胞,同步化48h后,一組繼續(xù)給予無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24h(模擬收縮型

2、VSMC表型),另一組給予含10%胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24h,并加入血管平滑肌刺激因子PDGF(Platelet-DerivedGrowthFactor血小板源性生長因子)(模擬合成型VSMC表型),以模擬體內(nèi)血管平滑肌細胞的正常和增殖表型。應(yīng)用RT-PCR,Western-Blot技術(shù)檢測RB基因和TSC2基因在不同表型的VSMC中的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.免疫熒光鑒結(jié)果:
　　 倒置顯微鏡下觀察VS

3、MC呈梭形,束狀排列,胞質(zhì)豐富,核里圓形或卵圓形,大小不一的核仁,密度較高時呈“峰-谷”狀生長。用α-SM-actin進行免疫熒光化學(xué)鑒定,證實培養(yǎng)的細胞為VSMC為血管甲滑肌細胞。
　　 2.RT-PCR結(jié)果顯示:
　　 合成型VSMC中,R13基因和TSC2的表達均較少,RB基因為內(nèi)參(GAPDH)的(0.24±0.03)倍,TSC2基因為內(nèi)參(GAPDH)的(0.30±0.04)倍;收縮型VSMC中RB和TSC2基

4、因的表達較多,RB基因為內(nèi)參(GAPDH)的(0.81±0.02)倍,TSC2基因為內(nèi)參(GAPDH)的(0.566±0.03)倍。t檢驗證明這一結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.Western-Blot蛋白印跡結(jié)果顯示:
　　 收縮型VSMC中,RB蛋白和TSC2蛋白的表達均較多;而P-RB蛋白及P-TSC2蛋白的表達均較少。RB蛋白的光密度值為(0.613±0.03),P-RB的光密度值為(0.233±0

5、.02)。TSC2蛋白的光密度值為(0.456±0.01);P-TSC2的光密度值為(0.17±0.04)。
　　 合成型VSMC中,RB蛋白和TSC2蛋白的表達均較少;而P-RB蛋白及P-TSC2蛋白的表達均較多。RB蛋白的光密度值為(0.184±0.02),P-RB的光密度值為(0.704±0.03)TSC2蛋白的光密度值為(0.212±0.04),P-TSC2的光密度值為(0.436±0.03)。t檢驗證明這一結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)