CGRP對血管平滑肌細胞增殖及CDK2和Cyclin E表達的影響.pdf

1、目的：觀察降鈣素基因相關肽（CGRP）對胎牛血清（FBS）刺激的大鼠血管平滑肌細胞（VSMCs）增殖作用的影響，并探索此作用與細胞外信號調節(jié)激酶（ERK1/2）和細胞周期調節(jié)蛋白CDK2、CyclinE的關系。 方法：組織貼塊法體外培養(yǎng)大鼠胸主動脈VSMCs，取其第3 ~ 10代用于實驗。靜止期細胞用不同濃度CGRP處理30 min后再加以血清刺激細胞24 h，噻唑藍比色法（MTT）觀察CGRP對VSMCs增殖的濃度效應；取最適

2、濃度的CGRP預孵育VSMCs 30min后，加入10％FBS（12 h、24 h、48 h），MTT觀察CGRP對血清誘導大鼠VSMCs增殖的影響；流式細胞儀（FCM）觀察分析VSMCs細胞周期分布特征的改變；Western blot檢測細胞內p-ERK1/2、CDK2和CyclinE的表達。 結果：MTT法顯示CGRP（0.1 ~ 100 nmol·L-1）能濃度依賴性地抑制大鼠VSMCs的增殖，10 nmol·L-1CGR

3、P預孵育VSMCs 30min后，能降低10％FBS誘導的大鼠VSMCs的生存率；流式細胞儀分析10 nmol·L-1 CGRP 預孵育后能降低血清誘導的細胞S期細胞百分比，升高G1期細胞百分比，降低細胞增殖指數（PI）；Western blot檢測結果顯示，10 nmol·L-1CGRP干預下能抑制血清刺激的大鼠VSMCs內p-ERK1/2、CDK2和CyclinE的表達；50 nmol·L-1CGRP8-37（CGRP受體拮抗劑）能