CGRP對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖及CDK2和Cyclin E表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）對(duì)胎牛血清（FBS）刺激的大鼠血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）增殖作用的影響，并探索此作用與細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK1/2）和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白CDK2、CyclinE的關(guān)系。 方法：組織貼塊法體外培養(yǎng)大鼠胸主動(dòng)脈VSMCs，取其第3 ~ 10代用于實(shí)驗(yàn)。靜止期細(xì)胞用不同濃度CGRP處理30 min后再加以血清刺激細(xì)胞24 h，噻唑藍(lán)比色法（MTT）觀察CGRP對(duì)VSMCs增殖的濃度效應(yīng)；取最適

2、濃度的CGRP預(yù)孵育VSMCs 30min后，加入10％FBS（12 h、24 h、48 h），MTT觀察CGRP對(duì)血清誘導(dǎo)大鼠VSMCs增殖的影響；流式細(xì)胞儀（FCM）觀察分析VSMCs細(xì)胞周期分布特征的改變；Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)p-ERK1/2、CDK2和CyclinE的表達(dá)。 結(jié)果：MTT法顯示CGRP（0.1 ~ 100 nmol·L-1）能濃度依賴性地抑制大鼠VSMCs的增殖，10 nmol·L-1CGR

3、P預(yù)孵育VSMCs 30min后，能降低10％FBS誘導(dǎo)的大鼠VSMCs的生存率；流式細(xì)胞儀分析10 nmol·L-1 CGRP 預(yù)孵育后能降低血清誘導(dǎo)的細(xì)胞S期細(xì)胞百分比，升高G1期細(xì)胞百分比，降低細(xì)胞增殖指數(shù)（PI）；Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，10 nmol·L-1CGRP干預(yù)下能抑制血清刺激的大鼠VSMCs內(nèi)p-ERK1/2、CDK2和CyclinE的表達(dá)；50 nmol·L-1CGRP8-37（CGRP受體拮抗劑）能