豐富環(huán)境刺激及水療對新生鼠缺氧缺血性腦損傷的干預(yù)效應(yīng).pdf

1、目的：缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemicbraindamage，HIBD)是圍產(chǎn)期窒息的一個重要并發(fā)癥，也是新生兒期的常見病，嚴(yán)重威脅新生兒的生命和健康，并可導(dǎo)致兒童永久傷殘，至今缺乏理想有效的治療手段。對眾多動物模型的研究已證實：環(huán)境刺激及身體自愿物理運動可以誘導(dǎo)大腦結(jié)構(gòu)及功能的改變。本試驗將豐富環(huán)境刺激及水療運用于7日齡(postnatalday7，P7)HIBD新生大鼠，予以不同方法對新生大鼠HIBD進(jìn)行干預(yù)，檢測

2、大鼠的體重，學(xué)習(xí)記憶能力，患側(cè)海馬的病理形態(tài)學(xué)改變和透射電鏡下超微結(jié)構(gòu)變化，以及大鼠海馬N-甲基-D-天門冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)受體蛋白的表達(dá)，探討豐富環(huán)境刺激和水療對發(fā)育期腦損傷的作用效果及其可能的機(jī)制，旨在為臨床治療新生兒缺氧缺血性腦病，促進(jìn)患兒腦功能的恢復(fù)提供理論依據(jù)和指導(dǎo)。 方法：采用Rice法建立P7大鼠HIBD模型，分為干預(yù)組與非干預(yù)組，另設(shè)假手術(shù)對照組。干預(yù)組又分為豐富環(huán)境組、

3、水療組、豐富環(huán)境+水療組，在缺氧缺血(hypoxia-ischemia，HI)第2天分別予相應(yīng)干預(yù)治療，持續(xù)28d。于生后不同時點(15d，22d，29d，36d)檢測大鼠體重，以免疫組織化學(xué)法檢測海馬CA1區(qū)NMDA受體NR1亞單位的表達(dá)，HE染色觀察生后36d時相點大鼠患側(cè)海馬病理形態(tài)學(xué)改變，干預(yù)結(jié)束后(生后37d)利用Morris水迷宮測定各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，并于生后40d利用透射電鏡觀察海馬超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：

4、1.體重上，HI后8d(生后15d)，假手術(shù)組顯著高于干預(yù)組與非干預(yù)組(p＜0.01)，干預(yù)組與非干預(yù)組無顯著差異(p＞0.05)；HI后15d，22d及29d(生后22d，29d及36d)，干預(yù)組和假手術(shù)組顯著高于非干預(yù)組(p＜0.01)，干預(yù)組與假手術(shù)組無顯著差異(p＞0.05)。 2.新生大鼠HI后8d，各組HIBD大鼠均出現(xiàn)不同程度的左側(cè)腦組織萎縮，伴有發(fā)白梗死區(qū)、軟化灶等組織病理改變，其中非干預(yù)組最明顯。HI后29d(

5、生后36d)，HE染色見假手術(shù)組雙側(cè)海馬結(jié)構(gòu)清晰，布局有序，神經(jīng)元形態(tài)正常，排列整齊。干預(yù)組左側(cè)海馬輕度異常，神經(jīng)元排列稍紊亂，可見少量細(xì)胞丟失。非干預(yù)組左側(cè)海馬明顯異常，細(xì)胞層數(shù)減少，大量細(xì)胞丟失，神經(jīng)元排列稀疏、散亂，細(xì)胞間隙增大，核仁不清，可見核固縮、核碎裂。 3.透射電鏡下，HI后33d(生后40d)，假手術(shù)組大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)正常，染色質(zhì)密度中等，突觸發(fā)育成熟，突觸小泡豐富，突觸后膜致密物(postsynapticde

6、nsity，PSD)多，結(jié)構(gòu)致密。干預(yù)組左側(cè)大鼠海馬神經(jīng)元無明顯病理改變，突觸小泡和PSD略有減少，其中又以豐富環(huán)境組及豐富環(huán)境+水療組稍好。非干預(yù)組大鼠見左側(cè)海馬神經(jīng)元固縮改變，核膜皺折，染色質(zhì)致密，突觸小泡和PSD明顯減少。 4.HI后29d(生后36d)，干預(yù)組、假手術(shù)組海馬CA1區(qū)NR1表達(dá)明顯強(qiáng)于非干預(yù)組，其中豐富環(huán)境組、豐富環(huán)境+水療組與假手術(shù)組無顯著差異(p＞0.05)，水療組仍明顯弱于假手術(shù)組。 5.Mo

7、rris水迷宮實驗中，干預(yù)組、假手術(shù)組大鼠測試成績明顯優(yōu)于非干預(yù)組(p＜0.01)，其中豐富環(huán)境組、豐富環(huán)境+水療組與假手術(shù)組無顯著差異(p＞0.05)，而單純水療組明顯低于假手術(shù)組(p＜0.01)。 結(jié)論： 1.7日齡大鼠采用Rice法制成HIBD模型，非干預(yù)組大鼠體重在HI后增長緩慢；無論是HE染色還是電鏡觀察結(jié)果，非干預(yù)組大鼠患側(cè)腦組織均可見明顯的病理形態(tài)學(xué)改變；其遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力降低，均證實本實驗。HIBD動物模

8、型建立成功可行。 2.與非干預(yù)組HIBD大鼠相比，干預(yù)組HIBD大鼠體重經(jīng)過一短暫緩慢增長期后進(jìn)入快速增長期，體重增長明顯，并且海馬病理損害減輕，其遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶能力增強(qiáng)，提示豐富環(huán)境刺激及水療有利于體格發(fā)育及腦損傷修復(fù)。 3.新生大鼠HIBD后期存在海馬NMDA受體的表達(dá)下調(diào)，降低了HIBD新生大鼠海馬內(nèi)的突觸傳遞效能，而豐富環(huán)境刺激和水療能有效改善HIBD新生大鼠發(fā)育過程中海馬內(nèi)的突觸傳遞，增強(qiáng)突觸可塑性。NMDA受體