抗壞血酸過氧化物酶OsAPX2轉(zhuǎn)化大豆及耐旱功能分析.pdf

1、干旱脅迫是影響作物產(chǎn)量提高和品質(zhì)改良重要限制因子，據(jù)統(tǒng)計每年由于干旱脅迫導致的作物產(chǎn)量損失約為其它非生物脅迫因子引起產(chǎn)量損失的總和。因此，發(fā)掘和利用植物耐旱基因，選育耐旱轉(zhuǎn)基因新品種（系）是解決這一問題重要途徑。本研究以水稻抗壞血酸過氧化物酶OsAPX2為轉(zhuǎn)化對象，將其轉(zhuǎn)入不同大豆品種，研究OsAPX2在轉(zhuǎn)基因大豆中的耐旱功能，并創(chuàng)制轉(zhuǎn)基因耐旱新種質(zhì)，為今后選育耐旱轉(zhuǎn)基因大豆新品系（種）提供重要材料。主要研究結(jié)果如下:
　　1、利

2、用發(fā)根農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)證實了OsAPX2能夠提高轉(zhuǎn)基因大豆毛狀根耐旱性。構(gòu)建OsAPX2的GUS、GFP融合表達載體，并轉(zhuǎn)化發(fā)根農(nóng)桿菌菌株K599，同時以pBI121-GUS、pCamA-GFP、pCambia3301-OsAPX2為對照，分別獲得了PCR檢測為陽性的轉(zhuǎn)基因大豆毛狀根;經(jīng)GUS染色和熒光顯微觀察證實了融合基因OsAPX2∷GUS、OsAPX2∷GFP均能在大豆毛狀根正常表達，且轉(zhuǎn)基因毛狀根在干旱脅迫處理條件下的過氧化氫

3、(H2O2)、丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)含量的上升量顯著低于野生型，說明OsAPX2具有提高轉(zhuǎn)基因大豆毛狀根耐旱性功能。
　　2、利用根癌農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)證實了OsAPX2具有提高轉(zhuǎn)基因大豆植株耐旱性的功能。利用根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化技術(shù)將OsAPX2轉(zhuǎn)化大豆品種，獲得了9個轉(zhuǎn)基因株系，實時定量PCR分析發(fā)現(xiàn)，9個轉(zhuǎn)OsAPX2株系的OsAPX2表達量存在較大差異，其中以L1、L2、 L33與L34株系表達量較高;分析9個轉(zhuǎn)Os

4、APX2大豆株系抗壞血酸過氧化物酶活性發(fā)現(xiàn)，以L1、L2、L33與L34株系過氧化物酶活性較高，與實時定量PCR結(jié)果一致;轉(zhuǎn)基因株系L33和L34在干旱脅迫處理條件下的H2O2、MDA、Pro含量上升量均較野生型低，而葉片相對含水量下降不顯著，說明OsAPX2具有提高轉(zhuǎn)基因大豆植株耐旱性的作用;分析L33、L34成熟期產(chǎn)量相關(guān)性狀發(fā)現(xiàn)，干旱脅迫條件下，轉(zhuǎn)基因株系部分產(chǎn)量相關(guān)性狀優(yōu)于野生型對照。
　　3、利用花粉管通道遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)獲