用人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞篩選人類(lèi)抗砷相關(guān)基因.pdf

1、目的：長(zhǎng)期低劑量亞砷酸鈉誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，從而建立抗砷細(xì)胞模型，篩選人類(lèi)抗砷相關(guān)基因。 方法：常規(guī)條件下分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，檢測(cè)部分生物學(xué)特性；實(shí)驗(yàn)組用1 μmol/L的亞砷酸鈉誘導(dǎo))14周，對(duì)照組不加砷劑平行培養(yǎng)；48小時(shí)急性砷毒性試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生存率；免疫熒光染色及熒光激活細(xì)胞分選術(shù)鑒定誘導(dǎo)前后細(xì)胞表面分子；流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期及凋亡檢測(cè)；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)不同誘導(dǎo)時(shí)間金屬硫蛋白MT1E、多藥耐藥蛋白基因MRP

2、1、人類(lèi)抗砷相關(guān)基因HARRG的表達(dá)豐度；軟瓊脂試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞是否發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞獲得抗砷性之后，抽提并純化實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞總RNA，分別與Affymetrix UC133 plus 2.0 cDNA表達(dá)譜芯片雜交，生物信息學(xué)分析差異表達(dá)基因并初步進(jìn)行功能分類(lèi)。 結(jié)果：低劑量亞砷酸鈉急性刺激能夠促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖，長(zhǎng)期誘導(dǎo)則表現(xiàn)為抑制細(xì)胞生長(zhǎng)：1 μmol/L，的亞砷酸鈉誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞10周后細(xì)胞初步表現(xiàn)出

3、了抗砷性，14周后抗性較明顯。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞砷誘導(dǎo)后表型無(wú)明顯變化，而細(xì)胞周期的變化較大，急性刺激期G2/M期和S期細(xì)胞增加，G0/G1期細(xì)胞減少，適應(yīng)后細(xì)胞周期恢復(fù)至誘導(dǎo)前水平：長(zhǎng)期1 μmol/L亞砷酸鈉誘導(dǎo)不引起人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞發(fā)生凋亡，超過(guò)5 μmol/L急性刺激則能夠誘導(dǎo)其凋亡；人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞砷誘導(dǎo)一定時(shí)期內(nèi)MTlE、MRP1、HARRG表達(dá)增高，并呈動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)；長(zhǎng)期砷誘導(dǎo)后人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在雙層軟瓊脂上不能克隆