環(huán)孢菌素A通過(guò)結(jié)合Cyp抑制mPTP開(kāi)放對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:環(huán)孢菌素A(CsA)通過(guò)結(jié)合親環(huán)蛋白D(CYPD)抑制線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔(mPTP)開(kāi)放，維持線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)和阻止凋亡誘導(dǎo)因子釋放，從而抑制細(xì)胞的壞死和凋亡，改善神經(jīng)功能評(píng)分。本研究旨在探討環(huán)孢菌素A對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血的凋亡和壞死信號(hào)通路的影響。
　　方法:1.實(shí)驗(yàn)分組:240只雄性SD大鼠(280g-330g)隨機(jī)分為Sham組(n=48)、ICH組(n=48)、ICH+Vehicle(n=48)、ICH+CsA5mg組(

2、n=48)、ICH+ CsA10mg組(n=48)五個(gè)組。2.模型制作及藥物處理:大鼠腦出血模型是右側(cè)基底節(jié)區(qū)注射0.1ml自體全血（坐標(biāo):囟門(mén)前0.2毫米，旁3.5毫米和腹側(cè)深5.5毫米）。藥物處理組是術(shù)后15min經(jīng)尾靜脈注射給藥，后每天一次。3.神經(jīng)功能評(píng)分:采用華婭教授評(píng)分法進(jìn)行評(píng)分，分值越高代表神經(jīng)功能損害越輕，反之，損傷越重。4.腦水含量檢測(cè)及腦水腫觀察:腦出血后24h用干濕重法檢測(cè)腦水含量。腦出血后24h用MRI檢測(cè)腦水腫

3、情況。5.血腦屏障檢測(cè):腦出血后24h用伊文思藍(lán)法檢測(cè)血腦屏障通透性。6.細(xì)胞凋亡檢測(cè):腦出血后72h用TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。7.細(xì)胞壞死檢測(cè):腦出血后72h用PI法檢測(cè)細(xì)胞壞死。8.免疫熒光檢測(cè):腦出血后72h用免疫熒光檢測(cè)CypD、AIF及核AIF蛋白變化情況。9.免疫印記檢測(cè):腦出血后24h用免疫印記法檢測(cè)CypD、AIF及核AIF蛋白表達(dá)。10.線粒體觀察:腦出血后72h電鏡觀察線粒體形態(tài)變化。11.細(xì)胞形態(tài)觀察:腦出血后7

4、d用NISSL染色和HE染色檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。12.統(tǒng)計(jì)分析:采用SSPS17.0軟件，結(jié)果均以(x)±s表示，采用單因素方差分析，組間比較用Student's檢驗(yàn)分析的方法，P＜0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:1.腦出血后72h神經(jīng)功能評(píng)分顯著較Sham組差(p＜0.01)，CsA治療組較ICH組(p＜0.01)、ICH+Vehicle組(p＜0.01)顯著改善。2.腦出血后24h腦水含量顯著較Sham組增加(p＜0.01)，

5、ICH+CsA5mg組、ICH+ CsA10mg組較ICH組(p＜0.01)、ICH+Vehicle組(p＜0.01)顯著降低。腦出血后24h行MRI掃描示腦水腫顯著增強(qiáng)，治療組顯著減輕。3.腦出血后24h血腦屏障通透性較Sham組顯著破壞(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg組較ICH組、ICH+CsA5mg組顯著改善(p＜0.01)。4.腦出血后72h凋亡細(xì)胞數(shù)較Sham組顯著增加(p＜0.01)，ICH+CsA10mg組較IC

6、H組、ICH+CsA5mg組凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少(p＜0.01)，ICH+CsA5mg組較ICH+ CsA10mg組凋亡細(xì)胞數(shù)顯著增多(p＜0.01)。5.腦出血后72h壞死細(xì)胞數(shù)顯著較Sham組多(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg組較ICH組(p＜0.01)、ICH+CsA5mg組(p＜0.01)壞死細(xì)胞數(shù)顯著減少，ICH+CsA5mg組較ICH+ CsA10mg組壞死細(xì)胞數(shù)顯著增多(p＜0.01)。6.腦出血后24h用免疫印記

7、法檢測(cè)CypD、AIF及核AIF蛋白表達(dá)較Sham組顯著增加(p＜0.01)，ICH+ CsA10mg組較ICH組(p＜0.01)、ICH+CsA5mg組(p＜0.01)顯著降低。7.腦出血后72h線粒體水腫明顯，ICH+CsA5mg組、ICH+ CsA10mg組線粒體水腫好轉(zhuǎn)。8.腦出血后7d細(xì)胞衰減明顯，ICH+CsA5mg組、ICH+CsA10mg組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變且細(xì)胞數(shù)目未見(jiàn)顯著衰減。
　　結(jié)論:在ICH模型中，CsA能