2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:良性前列腺增生癥(BPH)是中老年男性泌尿外科的常見疾病。前列腺是由腺泡和間質兩部分組成的異質性器官。BPH是一種一間質增生為主的疾病,在間質增生中間質與上皮之間的比例較正常組織有顯著的升高。近年的研究表明,雌激素在間質增生的過程中發(fā)揮了重要的作用。
   雌激素作為一種重要的固醇類性激素,廣泛參與了細胞的增殖、分化、凋亡等過程。有報道稱雌激素在前列腺間質細胞中可以參與增殖和分化的調節(jié)過程,但其作用的分子機制尚未完全闡明。

2、本文旨在通過分子生物學和細胞生物學手段,研究雌激素在前列腺間質細胞中參與調節(jié)細胞增殖和平滑肌表型增加的分子機制,闡明雌激素在BPH發(fā)生發(fā)展過程中可能的作用,為臨床治療提供新的實驗依據。
   方法第一部分:用原代培養(yǎng)的人前列腺間質細胞和人正常前列腺間質細胞系WPMY-1作為實驗材料,添加雌二醇(E2)和BSA-E2刺激細胞,用MTT法和細胞計數法檢測細胞增殖,用Real-time RT-PCR和Western blot法檢測細胞

3、增殖核抗原(PCNA)的基因和蛋白水平;用Western blot法檢測雌激素對于細胞MAPK途徑重要激酶ERK1/2的激活情況;用PD98059選擇性阻斷MAPK途徑的激活,用MTT法和細胞計數法檢測雌激素刺激后的細胞增殖情況;使用Real-time RT-PCR方法檢測間質細胞中雌激素受體表達情況,構建ERα和GPR30的shRNA質粒,檢測雌激素通過哪種類型受體實現了快速激活MAPK途徑以及促增殖的作用。
   第二部分:

4、用原代培養(yǎng)的人前列腺間質細胞作為實驗材料,添加E2和BSA-E2刺激細胞,用Real-time RT-PCR檢測平滑肌特異基因smoothelin、SM2/SM1的基因表達水平,以Western blot法檢測SM-MHC的蛋白水平;用Real-time RT-PCR和雙抗體夾心ELISA法檢測TGF-β1的基因和蛋白水平;分別用PD98059、ICI182,780和TGF-β1中和抗體,研究雌激素促進間質細胞平滑肌表型增加的信號通路。

5、
   第三部分:在HEK293細胞中,用重組腺病毒技術包裝含有平滑肌特異基因SM22啟動子調控的紅色熒光蛋白(RFP)和CMV啟動子調控的綠色熒光蛋白(GFP)的重組腺病毒;用重組腺病毒感染原代培養(yǎng)的前列腺間質細胞,通過觀察組成型表達的GFP確定轉染效率,并通過感染平滑肌選擇性培養(yǎng)液和普通培養(yǎng)液富集的間質細胞中RFP的表達情況確定啟動子的特異性;使用流式細胞術分離RFP+/GFP+的平滑肌細胞和RFP-/GFP+的成纖維細胞,

6、用基因芯片的方法對其進行表達譜分析;用腺病毒感染結合流式細胞術檢測雌激素調節(jié)間質細胞平滑肌表型的作用。
   結果第一部分:E2和BSA-E2均能夠促進前列腺間質細胞的增殖,MAPK信號通路的選擇性抑制劑PD98059可有效阻斷這一過程。Western blot結果顯示,雌激素可以快速激活細胞內MAPK信號通路,引起ERK的磷酸化過程。前列腺間質細胞中表達ERα和GPR30,而不表達ERβ。用ERα和GPR30的shRNA質粒,

7、闡明了雌激素通過細胞膜上的ERα快速激活MAPK途徑,進而促進前列腺間質細胞的增殖。
   第二部分:E2和BSA-E2均能夠明顯的促進前列腺間質細胞的平滑肌細胞表型;E2和BSA-E2均能夠通過快速激活MAPK途徑促進間質細胞中TGF-β1的表達;用PD98059、ICI182,780和TGF-β1中和抗體與雌激素共同作用于細胞,PD98059和TGF-β1中和抗體均能夠部分阻斷E2促進平滑肌表型的作用,能夠完全阻斷BSA-E

8、2促進平滑肌細胞表型的作用:ICI182,780能夠部分阻斷E2促進平滑肌表型的作用,而對于BSA-E2引起平滑肌表型的增加,則無明顯的抑制效果,ICI182,780對于雌激素引起的MAPK途徑激活亦無明顯作用;聯合使用PD98059和ICI182,780或TGF-β1中和抗體和ICI182,780均能夠阻斷E2促進平滑肌細胞表型的作用。
   第三部分:成功構建并包裝了含有平滑肌特異基因SM22啟動子調控的RFP和CMV啟動子

9、調控的GFP的雙熒光重組腺病毒,并在原代間質細胞中獲得了極高的感染效率和特異性;使用流式細胞術體外分離經過感染的原代培養(yǎng)的間質細胞,對RFP+/GFP+細胞和RFP-/GFP+細胞使用基因芯片手段進行了表達譜分析;用流式細胞術結合腺病毒感染的方法研究了雌激素促平滑肌細胞表型的作用,獲得了與第二部分一致的結果。
   結論1.在前列腺間質細胞中,雌激素通過細胞膜上的ERα快速激活MAPK信號通路,促進前列腺間質細胞的增殖。

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