延邊奶山羊-綿羊體細胞克隆胚融合、激活條件的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、異種間的體細胞克隆技術為保護和拯救珍稀瀕危動物、人類器官移植開辟了一條嶄新的途徑,目前,雖然有種間體細胞核移植動物出生,但是較低的成功率限制了這項技術在實踐中的應用。種間核移植仍面臨著很大的困難,需要尋求適宜的供受體細胞組合及早期胚胎發(fā)育的環(huán)境。為了給動物種間核移植研究積累知識和經驗,本實驗對延邊奶山羊-綿羊重構胚的融合、激活做了預先一步的研究。
  本實驗采用延邊奶山羊耳皮膚成纖維細胞為供核細胞,以綿羊MⅡ期去核的卵母細胞為核移

2、植受體,構建了山羊-綿羊異質重構胚。我們設計了一系列的試驗以優(yōu)化延邊奶山羊-綿羊重構胚的融合激活效果,探討了不同融合電場強度、脈沖次數(shù)、脈沖時程、融合后平衡時間、融合液濃度及激活方法對重構胚融合率及重構胚體外發(fā)育率的影響。
  實驗結果如下:
  1、甘露醇濃度為0.25mol/L、0.28mol/L時重構胚的融合率(50.12%vs52.74%)和卵裂率(53.50%vs55.52%)差異不顯著(P>0.05),但與0.3

3、0mol/L組相比差異顯著(P<0.05),0.28 mol/L組的桑椹胚發(fā)育率(17.36%)明顯高于其他兩組,相比差異顯著(P<0.05);
  2、電場強度為1000v/cm時重構胚的融合率與其它各組之間相比差異顯著(P<0.05),電場強度為1200v/cm,1400v/cm以及1600v/cm時重構胚的融合率之間差異不顯著(P>0.05);1400v/cm的卵裂率(60.84%)和囊胚率(8.14%)最高,與1200 v

4、/cm相比差異不顯著(P>0.05),但與其他各組相比差異顯著(P<0.05);
  3、2次脈沖的融合率與1次脈沖相比差異顯著(P<0.05),但與3次電脈沖相比差異不顯著(P>0.05);2次脈沖的卵裂率(69.84%)和囊胚率(6.14%)顯著的高于1次和3次脈沖,差異顯著(P<0.05);,但1次和3次脈沖之間差異不顯著(P>0.05)。
  4、脈沖時程為40μs時重組胚的融合率(65.56%)高于其他各組,但差異

5、不顯著(P>0.05),但是卵裂率(58.90%)與其他三組(10μs、20μs、80μs)相比差異顯著(P<0.05)。脈沖時程為40μs的桑椹胚發(fā)育率為18.16%,與10μs組、80μs組相比差異顯著(P<0.05),但與20μs組相比差異不顯著(P>0.05)
  5、30min、60min、90min、120min不同的平衡時間的融合率差異不顯著(p>0.05),但90min組的卵裂率(70.62%)顯著高于其他三組,相

6、比差異顯著(p<0.05)。90min組的囊胚率為8.10%,顯著高于30min和120min組,但與60min組相比差異不顯著(p>0.05)。
  6、EH+CHX、EH+DMAP、Ion+CHX、Ion+DMAP四種激活方式卵裂率方面差異不顯著,但是在桑椹胚發(fā)育率方面,Ion+6-DMAP組(21.30%)顯著高于其他三組(18.90%、14.12%、15.34%),EH+CHX組與EH+6-DMAP組和Ion+6-DMAP

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