魚酮藤致乳鼠質(zhì)腦胺黑片多巴經(jīng)損傷實驗研神元的究.pdf

1、第一部分、中腦黑質(zhì)器官型腦片培養(yǎng)建立帕金森病模型。 目的：建立體外乳鼠器官型中腦黑質(zhì)腦片培養(yǎng)模型，為研究帕金森病建立實驗平臺。 方法：取10天齡Wistar乳鼠中腦黑質(zhì)腦片進行培養(yǎng)，加入低劑量魚藤酮，在倒置顯微鏡下直接觀察黑質(zhì)腦片的變化情況，測定腦片培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的含量利用免疫組化染色技術(shù)觀察黑質(zhì)中酪氨酸羥化酶(TH)陽性的多巴胺神經(jīng)元損傷情況。 結(jié)果：倒置顯微鏡下觀察腦片培養(yǎng)20余天內(nèi)能基本正常生

2、長，大約20余天后腦片活性下降并逐漸死亡；LDH檢測結(jié)果顯示腦片穩(wěn)定培養(yǎng)5-7天后LDH釋放水平降低；TH免疫組織化學(xué)染色顯示腦片結(jié)構(gòu)清晰，黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元顯示清晰，加入低劑量魚藤酮后的實驗組較對照組多巴胺神經(jīng)元數(shù)量較對照組明顯減少。 結(jié)論：20余天內(nèi)腦片基本生長良好，低劑量魚藤酮可以在黑質(zhì)腦片培養(yǎng)體系中選擇性地導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元凋亡，成功在乳鼠器官型中腦黑質(zhì)腦片上建立了帕金森病模型。 第二部分、魚藤酮致乳鼠黑質(zhì)腦片多巴

3、胺神經(jīng)元損傷的實驗研究。 目的：探討低劑量魚藤酮對乳鼠中腦黑質(zhì)腦片多巴胺能神經(jīng)元的毒性作用及依達拉奉的保護作用。 方法：取Wistar乳鼠中腦黑質(zhì)腦片進行培養(yǎng)，試驗組加入不同劑量魚藤酮，對照組中加入自由基清除劑依達拉奉；在倒置顯微鏡下直接觀察腦片黑質(zhì)部位的變化情況；測定腦片培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的含量；測定培養(yǎng)液中GSH-Px、SOD、MDA的含量；免疫組化染色技術(shù)觀察黑質(zhì)中酪氨酸羥化酶(TH)陽性的多巴胺神經(jīng)元損

4、傷情況；western-blot測定腦片中α-突觸核蛋白(α-Synuclein)的含量；電鏡觀察腦片超微病理結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：腦片經(jīng)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)魚藤酮可以以時間及劑量依賴的方式導(dǎo)致黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元的凋亡，α-synuclein表達增高（P<0.05），使用自由基清除劑依達拉奉后與對照組相比，DA神經(jīng)元凋亡和α-synuclein的生成均有減少。 結(jié)論:成功利用中腦腦片器官型培養(yǎng)體系建立了帕金森病模型；低劑量魚藤酮導(dǎo)致