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文檔簡介
1、目的 探討用限制片段差異顯示聚合酶鏈反應(yīng)(RestrictionFragmentDifferentialDisplay-PolymeraseChainedReaction,RFDD-PCR)技術(shù)建立基因差異表達(dá)譜的方法,及其應(yīng)用于高通量分析人類疾病差異表達(dá)譜的可行性。初步分析比較乳腺腫瘤各階段表達(dá)譜特征,篩選乳腺腫瘤侯選基因,為進(jìn)一步研究提供線索。材料與方法采集乳腺癌根治術(shù)病人的乳腺癌組織、乳腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及正常乳腺組織,用RFDD-P
2、CR技術(shù)平行操作,獲得三種組織全部轉(zhuǎn)錄組片段。然后以7%尿素變性聚丙烯酰胺電泳進(jìn)行表達(dá)差異基因片段的分離、顯示,結(jié)合http://www.Qbiogene.com/display/數(shù)據(jù)庫資料,應(yīng)用IMAGETOOL,ImageQuantTL等軟件,對各組織間有表達(dá)差異的基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,篩選乳腺腫瘤侯選基因。結(jié)果建立了乳腺癌組織、乳腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及正常乳腺組織的基因表達(dá)譜,獲得基因片段5407個(gè),其中在癌組織和正常組織間有表達(dá)差異
3、的片段為1491個(gè),癌組織與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)間的差異片段有1176個(gè),而轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)與正常組織間的差異片段為1462個(gè),分別占表達(dá)數(shù)的40.9%,33.9%,39.6%。經(jīng)差異片段的生物信息學(xué)分析,已篩選出部分乳腺癌侯選基因所對應(yīng)的條帶,包括新的乳腺腫瘤相關(guān)基因,如PPARA,BCL11B等,以及可能為新基因/EST的候選片段,有待進(jìn)一步研究證實(shí)。結(jié)論RFDD-PCR技術(shù)可以檢測出大量表達(dá)基因,并同時(shí)比較三種或三種以上樣本的表達(dá)差異,尤其適用于
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