子宮內(nèi)膜異位癥疼痛與神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體關(guān)系的研究.pdf

1、疼痛是子宮內(nèi)膜異位癥(以下簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥)患者最突出、最典型的癥狀之一，其主要表現(xiàn)為月經(jīng)期或經(jīng)行前后出現(xiàn)的腹痛、腰骶部疼痛，甚至劇痛難忍，如此影響廣大育齡婦女生活質(zhì)量及身心健康的疾病，其疼痛機(jī)制尚不明確。近年來(lái)，對(duì)疼痛產(chǎn)生的機(jī)制進(jìn)行了大量研究，最近研究較多的方向是子宮內(nèi)膜異位病灶內(nèi)的感覺(jué)神經(jīng)纖維。研究認(rèn)為，子宮內(nèi)膜異位癥的疼痛癥狀與病灶內(nèi)感覺(jué)神經(jīng)Aδ，感覺(jué)纖維C的分布異常增多相關(guān)。至于導(dǎo)致這種神經(jīng)纖維分布增多現(xiàn)象的原因，尚缺乏相關(guān)報(bào)道。國(guó)外

2、有報(bào)道內(nèi)異癥疼痛的神經(jīng)解剖機(jī)制，但未對(duì)轉(zhuǎn)換刺激的神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)研究，國(guó)內(nèi)對(duì)內(nèi)異癥疼痛機(jī)制研究目前還是空白。 與痛覺(jué)感受有關(guān)的致痛物質(zhì)主要是神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth facter，NGF)、白介素及腫瘤壞死因子α等。NGF屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族，是促進(jìn)神經(jīng)元存活的一類蛋白。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)NGF與其受體結(jié)合后誘導(dǎo)自磷酸化作用，引發(fā)多種生物效應(yīng)，其中包括誘導(dǎo)肥大細(xì)胞釋放5—羥色胺，導(dǎo)致痛覺(jué)過(guò)敏，在調(diào)節(jié)神經(jīng)病理性和非神經(jīng)病理性

3、疼痛中有著重要的作用。不同類型的內(nèi)異灶與疼痛的關(guān)系不同，其中卵巢內(nèi)膜異位囊腫與疼痛關(guān)系不明顯，深部侵潤(rùn)型異位灶與痛經(jīng)、CPP、性交痛以及大便痛都有密切的關(guān)系。2005年SCIENCE雜志載文認(rèn)為內(nèi)異癥疼痛以及對(duì)雌激素敏感的機(jī)制之一就是異位內(nèi)膜灶中神經(jīng)支配的形成，從而對(duì)中樞神經(jīng)元的活性產(chǎn)生廣泛和多種的影響。但這些國(guó)外研究樣本量均不大，研究分組缺乏不同程度疼痛癥狀之間，以及不同類型內(nèi)膜異位灶之間的對(duì)比，其所得的結(jié)論尚未完全統(tǒng)一，還沒(méi)有深入探

4、討神經(jīng)纖維、神經(jīng)遞質(zhì)以及致痛物質(zhì)在內(nèi)異灶中分布的量和質(zhì)的改變和疼痛程度之間的相關(guān)性，并且沒(méi)有對(duì)神經(jīng)纖維的異常分布進(jìn)行藥物的干預(yù)研究。國(guó)內(nèi)目前還沒(méi)有開展此類的臨床基礎(chǔ)研究。 研究目的: 1. 探討不同類型的內(nèi)異癥病灶中NGF及其受體TrkA、P75的分布和表達(dá)的差異，以及與疼痛程度的關(guān)系； 2. 探討內(nèi)異癥痛經(jīng)患者的在位內(nèi)膜中是否存在神經(jīng)生長(zhǎng)因子及受體TrkA、P75異常的高表達(dá)并進(jìn)行對(duì)比分析，進(jìn)一步豐富“在位內(nèi)膜

5、決定論”； 3. 探討雌、孕激素及GnRHa對(duì)體外培養(yǎng)痛經(jīng)患者在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜表達(dá)NGF、TrkA及P75NTR的影響。 研究方法: 1. 免疫組化及免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)NGF、TrkA及P75在子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶以及在位膜中的表達(dá)及共表達(dá)； 2. Western Blot及RT-PCR法檢測(cè)NGF、TrkA及P75在子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶以及在位膜中的表達(dá)； 3. Real-TimePCR法

6、檢測(cè)NGF、TrkA及P75在子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶以及在位膜中的表達(dá)； 4. 體外培養(yǎng)在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜，并細(xì)胞免疫熒光、流式細(xì)胞技術(shù)以及RT-PCR法檢測(cè)NGF、TrkA及P75在子宮內(nèi)膜異位癥患者病灶以及在位膜中的表達(dá)； 5. 以不同濃度的雌、孕激素及GnRHa作用于體外培養(yǎng)在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜細(xì)胞，RT-PCR法檢測(cè)NGF、TrkA及P75在細(xì)胞水平的表達(dá)； 6. 同一濃度雌激素作用下，RT-PCR法檢測(cè)不

7、同時(shí)間點(diǎn)NGF、TrkA及P75在細(xì)胞水平的表達(dá)； 7. E1ISA法檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥患者血清中NGF以及痛覺(jué)敏感相關(guān)肽(孤啡肽)的表達(dá)。 結(jié)果: 1. 內(nèi)異癥患者病灶內(nèi)的NGF及其受體P75的表達(dá)量依次為：宮骶韌帶>腹膜>巧囊。TrkA在腹膜中表達(dá)最高，其次是宮骶韌帶，巧囊表達(dá)最少； 2. 宮骶韌帶DIE病灶中，中重度痛經(jīng)組病灶內(nèi)表達(dá)NGF、TrkA及其受體P75較輕度或無(wú)痛經(jīng)癥狀的宮骶韌帶組高，而腹

8、膜及巧囊病灶NGF、TrkA及P75表達(dá)量與痛經(jīng)程度之間無(wú)明顯相關(guān)性； 3. 內(nèi)異癥患者宮骶韌帶病灶、腹膜病灶表達(dá)NGF、TrkA及P75表達(dá)量較非內(nèi)異癥患者高。而巧囊表達(dá)NGF及其受體TrkA、P75與非內(nèi)異癥患者比較無(wú)顯著差異； 4. 重度痛經(jīng)的患者子宮內(nèi)膜表達(dá)P75較無(wú)痛經(jīng)癥狀患者及對(duì)照組高； 5. 體外培養(yǎng)有痛經(jīng)癥狀內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)NGF及其受體TrkA較無(wú)痛經(jīng)癥狀的正常子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞高；

9、 6. 體外培養(yǎng)有痛經(jīng)癥狀內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞對(duì)NGFmRNA及其受體TrkAmRNA、P75mRNA的表達(dá)與對(duì)照組比較，無(wú)顯著差異。提示在位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞可能在轉(zhuǎn)錄后水平受到影響，從而增加了蛋白的表達(dá)； 7. 在位子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞及正常內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞在不同濃度的雌、孕激素作用后表達(dá)NGFmRNA、TrkAmRNA及P75mRNA，結(jié)果顯示干預(yù)前后無(wú)明顯變化； 8. 同一濃度的17β雌二醇干預(yù)內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜

10、及正常內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，藥物作用后24小時(shí)以內(nèi)，NGFmRNA、的表達(dá)從8小時(shí)至24小時(shí)期間開始有上升趨勢(shì)，而對(duì)照組有下調(diào)趨勢(shì)； 9. 不同濃度的GnRHa的作用下，異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞表達(dá)NGFmRNA、TrkAmRNA、P75mRNA明顯下降，有顯著性差異。而正常的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞，在GnRHa干預(yù)后，NGFmRNA、TrkAmRNA、P75mRNA表達(dá)的無(wú)明顯變化。內(nèi)異癥組與對(duì)照組比較，差異有顯著性； 10. 子宮內(nèi)膜異位

11、癥痛經(jīng)患者血漿內(nèi)孤啡肽含量較高，而無(wú)痛經(jīng)患者較低，對(duì)照組則更低，NGF在血清中表達(dá)趨勢(shì)同OFQ，且不隨月經(jīng)周期變而改變； 11. GnRHa治療史患者血清內(nèi)NGF在用藥后明顯下降，較痛經(jīng)患者低，甚至較正常人更低，提示使用GnRHa亦可以抑制外周血中的NGF的表達(dá)。GnRHa治療史患者血清OFQ的表達(dá)亦較未用藥組低。 結(jié)論: 1. 本課題首次研究了常見(jiàn)的幾種內(nèi)異癥病灶表達(dá)NGF、TrkA及P75表達(dá)。發(fā)現(xiàn)宮骶韌帶D

12、IE內(nèi)致痛物質(zhì)增加，重度疼痛較無(wú)或輕度疼痛患高。提示了宮骶韌帶DIE患者的疼痛可能與NGF及其受體TrkA及P75的表達(dá)有關(guān)。腹膜與巧囊病灶內(nèi)表達(dá)NGF、TrkA以及P75與疼痛程度無(wú)明顯相關(guān)性，提示腹膜及巧囊患者的疼痛可能與NGF及其受體的表達(dá)無(wú)關(guān)； 2. 體外培養(yǎng)痛經(jīng)患者在位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)NGF及其受體TrkA增加，提示內(nèi)異癥痛經(jīng)患者在位內(nèi)膜異常，進(jìn)一步豐富了“在位內(nèi)膜決定論”； 3. 體外培養(yǎng)在位子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞

13、及正常內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞在不同濃度的雌、孕激素作用24小時(shí)后表達(dá)NGFmRNA、TrkAmRNA及P75mRNA顯示干預(yù)前后無(wú)明顯變化，提示NGF在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)可能通過(guò)雌、孕激素以外的其他途徑產(chǎn)生； 4. GnRHa能明顯下調(diào)內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)NGFmRNA、TrkAmRNA及P75mRNA，這可能與GnRHa治療內(nèi)異癥疼痛的多重機(jī)制相關(guān)； 5. 血清中NGF及痛覺(jué)敏感相關(guān)肽在疼痛患者中有增高趨勢(shì)，提示疼