胃癌幽門螺桿菌L型感染與腫瘤增殖關(guān)系的研究.pdf

1、目的：研究幽門螺桿菌L型（helicobacter pylori L-form，Hp-L型）感染對胃癌增殖的影響及其在胃癌發(fā)生中的作用，探討其機制。
　　方法：（1）用胃癌BGC-823細(xì)胞與幽門螺桿菌L型分別以1：20、1：100、1：500共培養(yǎng)，在不同時段進(jìn)行以下實驗。①應(yīng)用倒置光顯微鏡觀察胃癌BGC-823細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；②應(yīng)用四甲基噻唑氮藍(lán)（MTT）法檢測細(xì)胞生長增殖率；③應(yīng)用流式細(xì)胞儀（FCM）檢測細(xì)胞周期；④應(yīng)用免疫

2、組化法（SP法）檢測胃癌BGC-823細(xì)胞的癌基因（skp2）、抑癌基因（p53）的表達(dá)和核增殖指數(shù)（Ki-67）的表達(dá)情況；⑤應(yīng)用原位雜交法檢測胃癌BGC-823細(xì)胞的癌基因（skp2）的表達(dá)情況。（2）收集慢性萎縮性胃炎、胃腸腺化生、胃不典型增生、胃腺癌各40例，以40例慢性淺表性胃炎（輕度）作為對照。①應(yīng)用革蘭染色和免疫組化（SP法）檢測其Hp-L型的感染情況；②應(yīng)用免疫組化法（SP法）和原位雜交法檢測上述組織的癌基因（skp2）

3、的表達(dá)，以及核增殖指數(shù)（Ki-67）和 p53等蛋白的表達(dá)情況，分析比較Hp-L型陽性的病變各組與對照組的關(guān)系，以及病變各組的Hp-L型陽性與skp2、Ki-67和p53表達(dá)陽性的相關(guān)性，分析其意義，進(jìn)一步探討Hp-L型感染對胃癌增殖影響及其在胃癌發(fā)生中的作用。
　　結(jié)果：①倒置顯微鏡下，見正常情況下胃癌BGC-823細(xì)胞生長較好，表現(xiàn)為不規(guī)則多邊形，貼壁生長，可融合成集落。將Hp-L型加入細(xì)胞后，細(xì)胞分裂增多，增殖旺盛，瘤巨細(xì)胞

4、增多，出現(xiàn)明顯的生長加速現(xiàn)象，且隨著Hp-L型濃度和作用時間的增加，上述表現(xiàn)越明顯，存在細(xì)菌濃度和作用時間的依賴性。②MTT法測定細(xì)胞生長增殖率的生長曲線顯示，Hp-L型對胃癌BGC-823細(xì)胞生長增殖有促進(jìn)作用，在24h增殖最顯著，隨著作用時間的延長和細(xì)菌濃度的增大，其促進(jìn)作用明顯，與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。③FCM檢測可見，Hp-L型影響胃癌BGC-823細(xì)胞周期的分布，使G0/G1期比例降低，S期比例升高，各組之

5、間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。④細(xì)胞爬片的原位雜交和免疫組化染色可見隨著細(xì)胞/細(xì)菌比例的增加和培養(yǎng)時間的延長，胃癌BGC-823細(xì)胞Skp2的mRNA和蛋白表達(dá)和Ki-67、p53蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)逐漸增加，與對照組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,各組之間比較差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。⑤慢性萎縮性胃炎、胃腸腺化生、胃不典型增生和胃癌組織的Hp-L型陽性率分別為22.50％、40.00%、65.00%和55.00%，

6、除胃癌組外其它病變組Hp-L型陽性率呈逐漸增高趨勢。病變各組與對照組的陽性率（15.00%）相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察革蘭染色切片發(fā)現(xiàn)，Hp和L型在病變組織中可聚集成堆，亦可散在分布。癌巢的壞死處幾乎無L型，正常組織內(nèi)較少見。在L型陽性的切片上均可見到其粘附于病變組織細(xì)胞表面的現(xiàn)象。Hp為革蘭染色陰性，呈紅色，L型大部分為革蘭染色陰性呈紅色，少數(shù)為革蘭染色陽性。Hp的細(xì)菌形態(tài)呈螺旋形、“S”形或海鷗形；L型的細(xì)菌形態(tài)呈多形

7、性：有圓球體、原生小體、巨形體、桿狀體和絲狀體等，但多數(shù)為圓球體。⑥慢性萎縮性胃炎、胃腸腺化生、胃不典型增生和胃癌中的Hp-L型陽性組的Skp2mRNA和蛋白表達(dá)陽性率與對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。且病變各組的Hp-L型陽性與Skp2mRNA和蛋白表達(dá)陽性呈正相關(guān)(r=0.90, r=0.90,均為 P<0.05)。上述病變各組Hp-L型陽性組的Ki-67蛋白表達(dá)陽性率與對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。且病

8、變各組的Hp-L型陽性與Ki-67蛋白表達(dá)陽性也呈正相關(guān)(r=0.87, P<0.05)。⑦p53蛋白在慢性淺表性胃炎不表達(dá)，但上述病變各組Hp-L型陽性組的p53蛋白表達(dá)陽性率與對照組相比均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。且病變各組的Hp-L型陽性與p53蛋白表達(dá)陽性也呈正相關(guān)(r=0.90, P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1．Hp-L型促進(jìn)胃癌細(xì)胞BGC-823的生長和增殖，存在時間和劑量依賴性。
　　2．Hp