慢性HBV感染不同階段肝組織HBVcccDNA含量與Th1-Th2的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　 研究慢性HBV感染不同階段肝組織HBVcccDNA定量與Th1/Th2的相關(guān)性，探討機(jī)體不同免疫狀態(tài)對HBVcccDNA的影響。
　　 方法：
　　 收集40例慢性HBV感染者及10例正常對照肝組織標(biāo)本。所有病例診斷符合中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會2000年9月西安聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》。根據(jù)慢性HBV感染不同階段分為4組。免疫耐受期11例，免疫清除期11例，低（非）復(fù)制期

2、8例，再激活期10例。
　　 采用real-time PCR方法檢測外周血、肝組織HBVDNA和肝組織HBVcccDNA，采用免疫組織化學(xué)方法檢測肝組織IL-10、IFN-γ的分布和表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、對慢性HBV感染不同階段肝組織HBVcccDNA定量與肝組織IFN-γ、IL-10的表達(dá)進(jìn)行Spearman相關(guān)分析
　　 肝組織HBVcccDNA定量與肝組織IFN-γ的表達(dá)在免疫清除期、

3、再激活期呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=-0.693，P<0.05；r=-0.666，P<0.05。而在免疫耐受期、低（非）復(fù)制期無相關(guān)，P>0.05。
　　 肝組織HBVcccDNA定量與肝組織IL-10的表達(dá)在免疫耐受期、免疫清除期、低（非）復(fù)制期、再激活期均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.866，P<0.01；r=0.693，P<0.05；r=0.744，P<0.05；r=0.701，P<0.05。
　　 2、按ALT

4、升高情況分為ALT≥2×ULN組、40≤ALT<2XULN組，對二組肝組織HBVcccDNA定量與肝組織IFN-γ、IL-10表達(dá)進(jìn)行Spearman相關(guān)分析
　　 當(dāng)ALT≥2×ULN時，肝組織HBVcccDNA定量與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)，r=-0.828，P<0.05。而當(dāng)40≤ALT<2×ULN時，無相關(guān)，P>0.05。
　　 當(dāng)ALT≥2×ULN時，肝組織HBVcccDNA定量與肝組織IL-10呈正相關(guān)，r=0.8

5、28，P<0.05。而當(dāng)40≤ALT<2×ULN時，無相關(guān)，P>0.05。
　　 3、慢性HBV感染不同階段肝組織IL-10、IFN-γ的表達(dá)
　　 免疫組織化學(xué)染色顯示：正常肝組織未見IL-10表達(dá)。慢性HBV感染者肝細(xì)胞可見IL-10表達(dá)，陽性細(xì)胞主要位于肝細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)，呈棕黃或深棕黃色細(xì)顆粒狀。慢性HBV感染各組與正常肝組織比較，IL-10陽性細(xì)胞明顯增多，染色強(qiáng)度增強(qiáng)，表達(dá)較正常對照組明顯增強(qiáng)（32.27 vs

6、8.00，27.64 vs8.00，32.00 vs8.00，28.00 vs8.00）P<0.01。慢性HBV感染各組之間比較無顯著性差異，P>0.05。
　　 正常肝組織未見IFN-γ表達(dá)，慢性HBV感染者肝細(xì)胞可見IFN-γ表達(dá)，陽性細(xì)胞主要位于肝細(xì)胞胞漿，少見于肝細(xì)胞核，呈棕黃色染色或棕黃色、深棕黃色細(xì)顆粒狀。慢性HBV感染各組IFN-γ與正常肝組織比較，IFN-γ陽性細(xì)胞明顯增多，染色強(qiáng)度增強(qiáng)，表達(dá)較正常對照組明顯增強(qiáng)

7、（21.14vs10.00，39.18 vs10.00，21.25 vs10.00，34.15 vs10.00）P<0.01。免疫清除期、再激活期肝細(xì)胞胞漿可見IFN-γ表達(dá)增強(qiáng)，位于胞漿和細(xì)胞核。IFN-γ在炎癥壞死區(qū)的肝細(xì)胞漿中表達(dá)明顯增強(qiáng)。免疫清除期、再激活期肝組織IFN-γ的表達(dá)高于免疫耐受期、低（非）復(fù)制期，P<0.05。而免疫清除期與再激活期、免疫耐受期與低（非）復(fù)制期IFN-γ的表達(dá)無顯著性差異，P>0.05。
　　

8、 免疫耐受期肝組織IL-10表達(dá)較IFN-γ增強(qiáng)（14.68 vs8.32）P<0.05。免疫清除期肝組織IFN-γ的表達(dá)較IL-10增強(qiáng)（14.27 vs8.73）P<0.05。低（非）復(fù)制期、再激活期IFN-γ、IL-10表達(dá)無顯著性差異，P>0.05。
　　 4、慢性HBV感染不同階段肝組織HBVDNA、HBVcccDNA的含量比較
　　 慢性HBV感染肝組織HBVDNA定量為6.68×102拷貝/mg-5.40

9、×107拷貝/mg，肝組織HBVcccDNA定量為1.00拷貝/mg-8.88×105拷貝/mg。免疫耐受期、免疫清除期、低（非）復(fù)制期、再激活期肝組織HBVDNA均為陽性，HBVcccDNA在四組中陽性例數(shù)分別為11/11、11/11、5/8、9/10。
　　 免疫耐受期、免疫清除期、低（非）復(fù)制期、再激活期肝組織HBVDNA定量平均秩次分別為32.09、26.00、10.63、9.60，HBVcccDNA定量平均秩次分別為3

10、0.45、28.00、6.94、12.15。肝組織HBVDNA在免疫耐受期和免疫清除期較低（非）復(fù)制期、再激活期明顯增高，P<0.01，免疫耐受期與免疫清除期、低（非）復(fù)制期與再激活期，均無顯著性差異，P>0.05。肝組織HBVcccDNA兩兩比較結(jié)果與肝組織HBVDNA相同。
　　 5、慢性HBV感染不同階段外周血HBVDNA的含量比較
　　 慢性HBV感染外周血HBVDNA定量為1.00拷貝/ml-7.41×107拷

11、貝/ml。免疫耐受期、免疫清除期、低（非）復(fù)制期、再激活期外周血HBVDNA陽性例數(shù)分別為11/11、11/11、0/8、10/10，血清HBVDNA定量平均秩次分別為28.36、30.55、4.50、13.60。免疫耐受期、免疫清除期、再激活期較低（非）復(fù)制期明顯增高，P<0.01，免疫耐受期、免疫清除期較再激活期明顯增高，P<0.01。
　　 6、對慢性HBV感染者肝組織HBVcccDNA定量與血清、肝組織HBVDNA定量進(jìn)

12、行Spearman相關(guān)分析
　　 慢性HBV感染者肝組織HBVcccDNA定量與血清HBVDNA、肝組織HBVDNA定量均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.842，P<0.001，r=0.856，P<0.001。肝組織HBVDNA定量與血清HBVDNA定量呈正相關(guān)，r=0.779，P<0.001。
　　 結(jié)論：
　　 1、慢性HBV感染不同階段機(jī)體免疫狀態(tài)不同，與肝組織HBVcccDNA關(guān)系不同。
　　 在

13、免疫清除期、再激活期IFN-γ表達(dá)較免疫耐受期、低（非）復(fù)制期增強(qiáng)，機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)較強(qiáng)，HBVcccDNA隨著IFN-γ的升高而降低，提示IFN-γ在免疫清除期、再激活期可能參與HBVcccDNA的清除；在免疫耐受期、免疫清除期、低（非）復(fù)制期、再激活期肝組織HBVcccDNA定量與肝組織IL-10均呈正相關(guān)，HBVcccDNA與IL-10增高具有一致性，說明IL-10的升高可能與乙肝病毒慢性持續(xù)感染密切相關(guān)。
　　 當(dāng)AL

14、T≥2×ULN時，肝組織IFN-γ表達(dá)明顯高于40≤ALT<2×ULN，且HBVcccDNA與肝組織IFN-γ表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，我們認(rèn)為機(jī)體免疫應(yīng)答已經(jīng)啟動，有利于病毒的清除，適合抗病毒治療。
　　 2、慢性HBV感染存在Th1/Th2失衡。主要表現(xiàn)在免疫耐受期和免疫清除期。在免疫耐受期中Th2占優(yōu)勢；在免疫清除期中Th1占優(yōu)勢。
　　 3、通過比較肝組織HBVcccDNA定量、血清HBVDNA、肝組織HBVDNA定量發(fā)現(xiàn)：