心肌肥厚、肥厚-逆轉(zhuǎn)和慢性心力衰竭心肌中PKCε信號(hào)復(fù)合物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、第一部分大鼠壓力負(fù)荷型心肌肥厚、肥厚-逆轉(zhuǎn)及慢性心力衰竭模型的建立及相關(guān)問(wèn)題探討 [目的]探討壓力負(fù)荷型心肌肥厚(POH)、肥厚-逆轉(zhuǎn)(POH-Re)、慢性心力衰竭(HF)模型的建立方法及其評(píng)價(jià)體系。 [方法]8w齡SD雄性大鼠隨機(jī)分入2組：腹主動(dòng)脈縮窄組(AAC)和假手術(shù)組(sham)。AAC組大鼠以1％戊巴比妥麻醉后行腎上腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)，sham組大鼠同樣麻醉、開(kāi)腹、游離腹主動(dòng)脈，但主動(dòng)脈只掛線不結(jié)扎。兩組動(dòng)物術(shù)后常

2、規(guī)使用抗生素3天。術(shù)后12w，所有大鼠行超聲心動(dòng)圖測(cè)定，根據(jù)超聲心動(dòng)圖測(cè)得的左室重量/體重(LVmass/BW)比值，AAC組大鼠中凡LVmass/BW升高者隨機(jī)分入心肌肥厚組(POH-NF，n=20)、逆轉(zhuǎn)組(POH-Re，n=12)、心衰組(POH-F，n=29)，進(jìn)行不同處理：POH-NF組處死取材；POH-Re組以福辛普利(Squibb，10mg/kg/day)和卡維地洛(Roche，0.5mg/kg/day)灌胃8w后處死取材

3、；POH-F組給予高鹽飲食12w后處死取材。所有動(dòng)物取材前先行超聲心動(dòng)圖測(cè)定，再經(jīng)頸動(dòng)脈插入心導(dǎo)管行血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定，最后取材，稱心、肺濕重，并作心、肺組織形態(tài)學(xué)觀察。 [結(jié)論]通過(guò)AAC法成功建立了大鼠POH模型，在此基礎(chǔ)上，給予長(zhǎng)期過(guò)度鈉負(fù)荷建立了CHF模型，而應(yīng)用ACEI+β阻滯劑聯(lián)合干預(yù)成功逆轉(zhuǎn)了POH。用超聲心動(dòng)圖、血流動(dòng)力學(xué)、心肺重量指數(shù)、鏡下心、肺組織形態(tài)學(xué)和癥狀觀察作為一個(gè)系統(tǒng)的評(píng)價(jià)體系，能較好地區(qū)分小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的

4、心肌肥厚和心力衰竭。 第二部分心肌肥厚、肥厚-逆轉(zhuǎn)和慢性心力衰竭心肌中PKCε信號(hào)復(fù)合物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究 [目的]探討壓力負(fù)荷型心肌肥厚(POH)、肥厚-逆轉(zhuǎn)、慢性心力衰竭(HF)過(guò)程中心肌PKCε的變化趨勢(shì)，并分析、比較、鑒定不同病程中心肌PKCε信號(hào)復(fù)合物成分的改變，探尋PKCε參與心肌肥厚和心衰的可能作用機(jī)制，為防治心肌肥厚和心衰提供新的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。 [方法]通過(guò)對(duì)8w齡SD雄性大鼠行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)

5、(AAC)建立POH模型，同齡的假手術(shù)組大鼠作為對(duì)照組。術(shù)后12w，根據(jù)超聲測(cè)得的左室重量指數(shù)(LVmass/BW)結(jié)果，AAC組大鼠被隨機(jī)分入心肌肥厚組(POH-NF，n=20)、逆轉(zhuǎn)組(POH-Re，n=12)、心衰組(POH-F，n=29)，進(jìn)行不同處理：POH-NF處死取材；POH-Re以福辛普利、卡維地洛灌胃8w后處死取材；POH-F給予高鹽飲食12w后處死取材。所有動(dòng)物在取材前均需行超聲心動(dòng)圖和血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定，取材后留取部分

6、心、肺組織作形態(tài)學(xué)觀察。然后對(duì)這三組動(dòng)物的心臟左室組織進(jìn)行WesternBlot分析，發(fā)現(xiàn)不同病變階段PKCε的變化趨勢(shì)。同時(shí)，三組動(dòng)物心臟左室勻漿分別與PKCε抗體免疫共沉淀，從而分離出相應(yīng)的PKCε復(fù)合物。得到的免疫共沉淀產(chǎn)物依次行雙向電泳和質(zhì)譜分析，比較這些PKCε復(fù)合物的成分和含量，鑒定有意義的差異蛋白質(zhì)，最后用免疫共沉淀和WesternBlot方法證實(shí)這些差異蛋白質(zhì)存在于PKCε復(fù)合物中。 [結(jié)論]PKCε通過(guò)形成不同