顱咽管瘤炎癥與細(xì)胞增殖性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：顱咽管瘤是顱內(nèi)上皮腫瘤之一，按世界衛(wèi)生組織劃分屬于Ⅰ級腫瘤，一般將其分為造釉細(xì)胞型顱咽管瘤和鱗狀乳頭型顱咽管瘤兩種病理類型。顱咽管瘤好發(fā)于鞍區(qū)，常見于兒童，占全年齡組顱內(nèi)腫瘤的4.7％～6.9％，占兒童顱內(nèi)腫瘤的1.2％-4.0％，而在兒童鞍區(qū)腫瘤中，顱咽管瘤約占50％左右。盡管顱咽管瘤在組織病理學(xué)上屬良性腫瘤，但是由于它與周圍重要的神經(jīng)血管組織的緊密粘連以及術(shù)后易復(fù)發(fā)、術(shù)后嚴(yán)重的并發(fā)癥等特點(diǎn)，所以臨床行為具有惡性特點(diǎn)。大量臨床資

2、料表明顱咽管瘤常常與視神經(jīng)、視交叉、垂體柄、下丘腦、顱底動(dòng)脈環(huán)等周圍重要神經(jīng)血管結(jié)構(gòu)緊密粘連，手術(shù)剝離非常困難，稍有不慎可能會(huì)造成嚴(yán)重的后果。我們前期研究發(fā)現(xiàn)顱咽管瘤存在復(fù)雜的炎癥反應(yīng)，顱咽管瘤與周圍結(jié)構(gòu)的緊密粘連、大量鈣化、囊液形成與炎癥密切相關(guān)，許多與與炎癥過程密切相關(guān)的因子如CD45、NF-□B、ICAM-1、OPN等在顱咽管瘤中表達(dá)，造釉細(xì)胞型顱咽管瘤炎癥反應(yīng)比鱗狀乳頭型顱咽管瘤嚴(yán)重。α-干擾素(Interferon-α，IFN

3、-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（The transforminggrowth factorβ，TGF-β1）是與炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子，在炎癥過程中有重要作用，并可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、腫瘤細(xì)胞凋亡、血管生成等機(jī)制調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生長增殖，在多種腫瘤細(xì)胞均有表達(dá)。IFN-α在炎癥過程中起促進(jìn)作用，很多研究證實(shí)其與NF-κ B、OPN關(guān)系密切。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中IFN-α能夠通過經(jīng)典的JAK-STAT信號通路誘導(dǎo)一氧化氮合酶/一氧化氮的合成，并抑制具有

4、抗炎癥作用的血紅素氧合酶-1(HO-1)合成以促進(jìn)炎癥。TGF-β1則具有炎癥抑制作用，可拮抗淋巴細(xì)胞的反應(yīng)，通過調(diào)控和抑制T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞的增殖而阻礙Th2細(xì)胞功能和細(xì)胞因子的生成，控制炎癥反應(yīng)的程度。小鼠敲除TGF-β1基因后單核細(xì)胞大量滲入全身多器官，出現(xiàn)嚴(yán)重炎性癥狀導(dǎo)致死亡;TGF-β1抑制中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，限制炎性細(xì)胞的滲出;TGF-β1還能抑制IL-1、IL-6、TNF-α和IFN-γ等炎癥因子的

5、產(chǎn)生。除了在炎癥方面的作用，IFN-α具有抗細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡、抑制腫瘤血管形成和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能，能明顯的抑制腫瘤生長，已用于多種腫瘤的治療，但其抗腫瘤機(jī)制還未完全明確。IFN-α可能一方面直接作用于腫瘤細(xì)胞，抑制原癌基因，誘導(dǎo)抑癌基因的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞增殖。另一方面則通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，激活包括巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、Th1、樹突狀細(xì)胞(DCS)等多種免疫細(xì)胞攻擊腫瘤細(xì)胞，使機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫機(jī)制

6、抑制腫瘤增殖。另外IFN-α還有很強(qiáng)的抗血管形成作用，抑制內(nèi)皮生長因子VEGF，抑制腫瘤血管的生成，進(jìn)而抑制腫瘤的生長。大量文獻(xiàn)表明，通過顱咽管瘤囊內(nèi)或全身注射IFN-α，可以減小顱咽管瘤囊液量，顱咽管瘤體積明顯減小甚至消失，說明IFN-α可以調(diào)節(jié)顱咽管瘤細(xì)胞的增殖，并可能與顱咽管瘤囊液形成等生物學(xué)特性存在聯(lián)系，但未區(qū)分不同病理類型的顱咽管瘤，而且其具體的機(jī)制尚不明確。TGF-β1是一種多功能的多肽類因子，廣泛參與多種疾病如腫瘤及器官纖

7、維化的發(fā)生和發(fā)展。目前認(rèn)為，在腫瘤早期階段TGF-β1可以抑制腫瘤生長，但腫瘤晚期TGF-β1卻促進(jìn)細(xì)胞的增殖擴(kuò)散及侵襲能力，幫助腫瘤細(xì)胞逃避免疫反應(yīng)。Fas為腫瘤壞死因子受體超家族的重要成員之一，是一種細(xì)胞表面受體，當(dāng)Fas/FasL結(jié)合后可以激活caspase-3，誘發(fā)表達(dá)Fas細(xì)胞凋亡。多種腫瘤細(xì)胞表面均有Fas表達(dá)，F(xiàn)as表達(dá)升高，可以增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的清除，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。Ierardi等通過往顱咽管瘤囊內(nèi)注射I

8、FN-α，發(fā)現(xiàn)腫瘤體積明顯減小，可能與IFN-α誘導(dǎo)Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有關(guān)。同時(shí)有大量文獻(xiàn)報(bào)道TGF-β1也可以調(diào)節(jié)Fas/FasL在腫瘤的表達(dá)。本研究旨通過檢測顱咽管瘤中IFN-α、TGF-β1、Fas的表達(dá)，研究其與顱咽管瘤炎癥的關(guān)系，探討IFN-α、TGF-β1在顱咽管瘤炎癥的作用，以及其在調(diào)節(jié)腫瘤增殖中的作用及機(jī)制，探討炎癥與細(xì)胞增殖的關(guān)系，是否可以在臨床手術(shù)治療顱咽管瘤前或腫瘤切除術(shù)后進(jìn)行干預(yù)，從而降低手術(shù)難度、提高腫瘤全切

9、率、減少顱咽管瘤的復(fù)發(fā)、避免術(shù)后進(jìn)行放療。因此，研究IFN-α、TGF-β1Fas在顱咽管瘤中的表達(dá)及作用機(jī)制具有重要的臨床意義。
　　 方法：⑴以2010年5月～2012年5月在我科進(jìn)行首次手術(shù)治療的顱咽管瘤病人為研究對象。入選患者共58例，其中男42例，女16例，年齡2～61歲，平均年齡31.0±18.9歲。病例納入標(biāo)準(zhǔn):①研究期間所有在我科進(jìn)行手術(shù)治療的顱咽管瘤患者，病歷記錄完整，有完整的術(shù)前影像檢查資料;②術(shù)后病理證實(shí)為

10、顱咽管瘤;③術(shù)前進(jìn)行過放化療的除外。⑵本研究分兩部分:一，收集顱咽管瘤標(biāo)本，探討IFN-α、TGF-β1與顱咽管瘤炎癥的關(guān)系及與鈣化、囊液形成等生物學(xué)特性的關(guān)系:1、運(yùn)用HE染色法檢測顱咽管瘤炎癥情況;2運(yùn)用免疫組織化學(xué)、Western Blot檢測腫瘤組織中IFN-α、TGF-β1的表達(dá)。二，探討炎癥與顱咽管瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系:運(yùn)用免疫組織化學(xué)、Western Blot檢測腫瘤組織中Fas的表達(dá)。⑶采用SPSS13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分

11、析。不同類型顱咽管瘤之間的各檢測指標(biāo)陽性表達(dá)率比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。兩指標(biāo)之間行Spearman相關(guān)分析，以P≤0.05為差異有顯著性。
　　 結(jié)果：①根據(jù)WH02007年神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤病理組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)對58例術(shù)后顱咽管瘤病理組織進(jìn)行常規(guī)HE染色分型，將其分為兩種類型:成釉細(xì)胞型44例，鱗狀細(xì)胞型14例。顱咽管瘤組織中可見血管分布，大量的炎性細(xì)胞如噬中性粒細(xì)胞等游離滲出血管，在腫瘤組織中可見大量炎性細(xì)胞的浸潤

12、。造釉細(xì)胞型顱咽管瘤中可見鈣化等退行性改變，鈣化周圍有大量的炎性細(xì)胞的聚集。而鱗狀乳頭型顱咽管瘤則以實(shí)性細(xì)胞為主，未見鈣化、囊液形成等退行性改變。②免疫組化顯示IFN-α在顱咽管瘤細(xì)胞核廣泛表達(dá)，呈現(xiàn)棕黃色顆粒。造釉細(xì)胞型顱咽管瘤大部分細(xì)胞核中有IFN-α表達(dá)，44例標(biāo)本中有40例表達(dá)陽性，IFN-α陽性率為90.91％，鱗狀乳頭型顱咽管瘤IFN-α在部分細(xì)胞核中表達(dá)，在14例標(biāo)本中有12表達(dá)陽性，造釉細(xì)胞細(xì)胞型顱咽管瘤IFN-α陽性表

13、達(dá)率高于鱗狀乳頭型顱咽管瘤(Z=-2.003，p＜0.05)。復(fù)發(fā)顱咽管瘤IFN-α陽性表達(dá)率高于初發(fā)組(Z=-2.085，p＜0.05)。③TGF-β1在鱗狀乳頭型顱咽管瘤細(xì)胞膜表達(dá)最為明顯，而在造釉細(xì)胞細(xì)胞型顱咽管瘤僅有少量表達(dá)(Z=-2.129，p＜0.05)。復(fù)發(fā)顱咽管瘤亦僅有少量表達(dá)，初發(fā)顱咽管瘤較復(fù)發(fā)顱咽管瘤的表達(dá)明顯（Z=-2.685，P＜0.05）。經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，在全部顱咽管瘤中，IFN-α的表達(dá)程度與T

14、GF-β1呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.273，p＜0.05）。④Western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)鱗狀細(xì)胞型顱咽管瘤的IFN-α蛋白表達(dá)量低于造釉細(xì)胞型顱咽管瘤的表達(dá)量;而TGF-β1則在鱗狀細(xì)胞型顱咽管瘤表達(dá)比較明顯，高于成釉細(xì)胞型顱咽管瘤TGF-β1的表達(dá)量。④Fas在造釉細(xì)胞型顱咽管瘤中表達(dá)最為明顯，主要是在細(xì)胞胞膜及細(xì)胞漿中;而在鱗狀細(xì)胞型顱咽管瘤表達(dá)量少，。經(jīng)Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析，F(xiàn)as表達(dá)在造釉細(xì)胞型與鱗狀細(xì)胞型之間

15、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-5.142，P＜0.05)。經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，隨著IFN-α表達(dá)的增加，F(xiàn)as表達(dá)程度顯著增強(qiáng)（rs=0.328，P＜0.05）。而Fas表達(dá)程度與TGF-β1呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.263，p＜0.05）。⑥Western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)鱗狀細(xì)胞型顱咽管瘤的Fas蛋白表達(dá)量低于造釉細(xì)胞型顱咽管瘤的表達(dá)量。
　　 結(jié)論：⑴顱咽管瘤有復(fù)雜的炎癥反應(yīng)，不同病理類型的顱咽管瘤IFN-α、TGF-β

16、1的表達(dá)程度不同。IFN-α可能是炎癥的趨化因子，促進(jìn)炎癥的發(fā)展，而TGF-β1是炎癥抑制因子從而抑制炎癥。炎癥可能是顱咽管瘤鈣化、囊液形成、與周圍結(jié)構(gòu)緊密粘連等生物學(xué)特性形成的一個(gè)重要原因，也是造成的腫瘤與腫瘤周圍組織粘連導(dǎo)致腫瘤切除不完全而復(fù)發(fā)的重要原因之一。⑵炎癥因子IFN-α、TGF-β1可以調(diào)節(jié)Fas的表達(dá)，從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖，IFN-α可以上調(diào)Fas表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，而TGF-β1相反可以抑制Fas表達(dá)促進(jìn)腫瘤增殖。