大腸癌中整合素ανβ3表達(dá)與血管生成擬態(tài)的關(guān)系及分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 研究大腸癌中是否存在血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry, VM)及其臨床意義;闡述大腸癌中整合素αvβ3表達(dá)及微血管密度(microvessel density, MVD)與臨床預(yù)后的關(guān)系;分析VM、MVD與整合素αvβ3、FAK、VEGF、MMP-2表達(dá)的關(guān)系及整合素αvβ3表達(dá)與FAK、MMP-2、VEGF表達(dá)、VM、MVD的相關(guān)性;進(jìn)一步探討大腸癌中整合素αvβ3參與VM、內(nèi)皮依賴性血管生

2、成的相關(guān)分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 收集天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院2000年至2004年手術(shù)切除大腸癌標(biāo)本227例，其臨床資料和隨訪資料完整，組織蠟塊保存完整，將組織蠟塊進(jìn)行5μm連續(xù)切片。通過CD31與PAS雙重染色觀察VM結(jié)構(gòu)并分析其臨床意義。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測整合素αvβ3、FAK、MMP-2、VEGF在大腸癌中的表達(dá)，運(yùn)用相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)上述指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。利用MVD對(duì)腫瘤血管進(jìn)行計(jì)數(shù)，研究其與臨床預(yù)后的

3、關(guān)系，分析其與整合素αvβ3、FAK、MMP-2、VEGF表達(dá)的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.大腸癌組織中VM的分布和臨床病理意義
　　 通過CD31與PAS雙重染色證實(shí)大腸癌組織中存在VM結(jié)構(gòu)，227例大腸癌組織中有41例存在VM結(jié)構(gòu)(41/227，18.06％)。VM的存在與否與患者年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)(P=0.442; P=0.491; P=1.000)，有VM組與無VM組大腸癌患者在腫瘤的分化程度、

4、TNM分期、轉(zhuǎn)移方面存在差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000; P=0.019; P=0.007）。利用Kaplan-Meier生存曲線比較大腸癌組織中有VM組與無VM組的生存率，結(jié)果顯示有VM組平均生存期為40.8個(gè)月，無VM組平均生存期為62.4個(gè)月，同一生存率情況下有VM組比無VM組生存期短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)。
　　 2.大腸癌組織中整合素αvβ3的表達(dá)及其臨床病理意義
　　 整合素αvβ3

5、免疫組化染色陽性表達(dá)產(chǎn)物主要位于腫瘤細(xì)胞胞漿及胞膜，大腸癌組織中整合素αvβ3表達(dá)在患者年齡、性別、腫瘤大小，TNM分期方面未見明顯差別（P=0.880;P=0.789;P=0.473;P=0.162），但是有轉(zhuǎn)移大腸癌患者整合素αvβ3陽性率(43.41％，56/129)明顯高于無轉(zhuǎn)移(27.55％，27/98)患者，兩者之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.018）。利用Kaplan-Meier生存曲線比較大腸癌組織中整合素αvβ3陽性組

6、與整合素αvβ3陰性組的生存率，結(jié)果顯示整合素αvβ3陽性組平均生存期為45.8個(gè)月，整合素αvβ3陰性組平均生存期為56.5個(gè)月，同一生存率情況下整合素αvβ3陽性組比整合素αvβ3陰性組生存期短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。
　　 3.大腸癌組織中MVD與臨床預(yù)后的關(guān)系
　　 統(tǒng)計(jì)顯示MVD與患者年齡、性別、腫瘤大小、分化程度無關(guān)（P=0.273; P=0.958; P=0.242;P=0.907）。轉(zhuǎn)移組

7、MVD高于無轉(zhuǎn)移組(P=0.000);大腸癌晚期(TNMⅢ期和Ⅳ期)患者M(jìn)VD高于早期（TNMⅠ期和Ⅱ期）患者(P=0.043);利用Kaplan-Meier生存曲線比較大腸癌組織中MVD≤28組與MVD＞28組的生存率，結(jié)果顯示MVD＞28組平均生存期為45.2個(gè)月，MVD≤28組平均生存期為57.4個(gè)月，同一生存率情況下MVD＞28組比MVD≤28組生存期短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002）(MVD平均值為27.3±8.8)。<

8、br>　　 4.大腸癌組織中VM與整合素αvβ3、FAK、VEGF、MMP-2表達(dá)的關(guān)系
　　 大腸癌組織中FAK、VEGF、MMP-2免疫組織化學(xué)染色陽性表達(dá)產(chǎn)物主要位于腫瘤細(xì)胞胞漿。227例大腸癌組織中有VM組整合素αvβ3、FAK、VEGF、MMP-2陽性率均高于無VM組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000;P=0.010;P=0.005;P=0.015）。
　　 5.大腸癌組織中MVD與整合素αvβ3、FAK、

9、VEGF、MMP-2表達(dá)的關(guān)系
　　 大腸癌組織中整合素αvβ3陽性組MVD高于整合素αvβ3陰性組(P=0.000);FAK陽性組MVD高于FAK陰性組(P=0.001);VEGF陽性組MVD高于VEGF陰性組(P=0.000);MMP-2陽性組MVD高于MMP-2陰性組(P=0.000)。
　　 6.整合素αvβ3的表達(dá)與FAK、VEGF、MMP-2表達(dá)的相關(guān)性分析
　　 整合素αvβ3的表達(dá)與FAK的表達(dá)呈

10、正相關(guān)(r=0.181，P=0.005);整合素αvβ3的表達(dá)與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.177，P=0.007);整合素αvβ3的表達(dá)與MMP-2的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.313，P=0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)通過CD31/PAS雙重染色證實(shí)，大腸癌中存在VM，VM是一種區(qū)別于經(jīng)典腫瘤血管生成的獨(dú)特的腫瘤微循環(huán)模式;存在VM的大腸癌患者更易發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后更差;VM是評(píng)估大腸癌患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的

11、危險(xiǎn)因素。
　　 2.227例大腸癌中有129例整合素αvβ3免疫組織化學(xué)染色陽性;整合素αvβ3陽性患者更易發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后更差;整合素αvβ3陽性表達(dá)是評(píng)估大腸癌患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　 3.大腸癌中MVD與患者的TNM分期、轉(zhuǎn)移密切相關(guān);MVD可作為評(píng)估大腸癌患者預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的因素。
　　 4.VM陽性的大腸癌患者整合素αvβ3、FAK、MMP-2、VEGF陽性率均高于VM陰性患者;本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示

12、:整合素αvβ3、FAK、MMP-2、VEGF可能參與了大腸癌中VM的形成。Spearman相關(guān)性分析顯示，整合素αvβ3的表達(dá)與FAK的表達(dá)呈正相關(guān)，推測整合素αvβ3可能通過與FAK相互作用，激活FAK后，活化的FAK調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附作用及細(xì)胞骨架的重組，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲性和轉(zhuǎn)移能力，最終導(dǎo)致VM的形成;整合素αvβ3的表達(dá)與MMP-2的表達(dá)呈正相關(guān)，推測整合素αvβ3可能通過與MMP-2結(jié)合，調(diào)節(jié)MMP-2

13、的活性，活化的MMP-2通過降解細(xì)胞外基質(zhì)成分(例如促進(jìn)下游的laminin5γ2分解成5γ2'和5γ2x片段），調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)進(jìn)行重塑，最終導(dǎo)致VM的形成;同時(shí)Spearman相關(guān)性分析顯示，整合素αvβ3的表達(dá)與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)，推測整合素αvβ3也可能通過與VEGF的相互作用，影響VM的形成。
　　 5.大腸癌組織中整合素αvβ3、FAK、MMP-2、VEGF陽性組MVD均高于相