牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)及玻璃化防止措施研究.pdf

1、本試驗以牡丹種子和土芽為外植體進行研究。包括：牡丹無菌培養(yǎng)體系建立；牡丹子葉誘導(dǎo)分化過程中生理生化變化；牡丹增殖技術(shù)；牡丹試管玻璃化苗的形態(tài)解剖、生理生化、控制方法。試驗結(jié)果如下：
　　1．初代培養(yǎng)：牡丹種子萌發(fā)培養(yǎng)最優(yōu)培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0mg·L-1+TDZ0.25mg·L-1。土芽最優(yōu)培養(yǎng)基為：MS+6-BA0.5mg·L-1+GA30.25mg·L-1。
　　2．牡丹子葉愈傷組織誘導(dǎo)及分化最優(yōu)培養(yǎng)基為：MS+

2、6-BA0.5mg·L-1+TDZ0.25mg·L-1+2,4-D1.5mg·L-1。牡丹再生苗誘導(dǎo)生根最優(yōu)培養(yǎng)基為：1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA4.0mg·L-1?！枴c‘鳳丹白’子葉愈傷分化芽過程中生理生化變化結(jié)果是：兩種愈傷組織隨著培養(yǎng)時間增加，生理指標差異越來越顯著，能分化出芽的愈傷組織比不能分化出芽的愈傷組織內(nèi)部代謝增強，呈明顯的上升趨勢，不能分化出芽的愈傷組織中的各項指標的變化比較平緩。
　　3．

3、牡丹增殖培養(yǎng)：先采用單因素試驗，選取試驗因素與水平，進行響應(yīng)面分析。在分析各因素之間的顯著性及交互作用的基礎(chǔ)上，得出最優(yōu)培養(yǎng)基是：BA1.05mg·L-1+KT0.41mg·L-1+NAA0.77mg·L-1+TDZ0.05mg·L-1，結(jié)果增殖系數(shù)可提高原來的4.36倍。牡丹增殖苗生根最優(yōu)培養(yǎng)基是：1/2MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+IBA3.0mg·L-1，其中IBA為主要影響因素，在此條件下，‘彩繪’

4、的生根率可以達到57.98％。
　　4．牡丹試管玻璃化苗與正常苗的形態(tài)解剖結(jié)構(gòu)有很大差異。形態(tài)學(xué)區(qū)別是：正常苗葉片薄而平展，植株生長健壯；玻璃化苗葉片狹小皺縮并縱向卷曲，整個植株莖透明腫脹，矮小。細胞學(xué)區(qū)別是：正常苗細胞間隙小，排列緊密，葉綠體數(shù)量多；玻璃化苗細胞間隙大，細胞內(nèi)出現(xiàn)較大的空洞，葉綠體數(shù)量少。
　　5．牡丹正常苗與不同程度玻璃化苗的生理生化變化是：與正常苗相比，玻璃化苗是隨著玻璃化程度的增加，葉綠素含量、可溶性

5、蛋白含量、可溶性糖含量、還原糖含量、CAT酶活性、PAL酶活性逐漸減少，而玻璃化苗的 POD酶活性與含水量，是隨著玻璃化程度的增加，而升高。
　　6．防止牡丹玻璃化發(fā)生的主要措施有：(1)采用透氣性好的棉塞，可將玻璃化率控制到6.8%；(2)PVA提高到3g·L-1，可將玻璃率控制到10.7%；(3)pH調(diào)至6.6，玻璃化率可控制到13.7%；(4)在2月取材，玻璃率控制到3.3%；(5)活性炭添加為4～6 g·L-1，無玻璃化出