有機殺蟲劑雙氫魚藤酮對人漿細胞的促凋亡作用及其機理研究.pdf

1、研究背景和目的：雙氫魚藤酮（DHR）是天然殺蟲劑魚藤酮的代謝產(chǎn)物，與魚藤酮一樣廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，包括漁業(yè)、園藝和有機農(nóng)產(chǎn)品等。DHR是一個有效的線粒體抑制劑并可能引起帕金森樣綜合癥，然而DHR對其他系統(tǒng)的作用尚不清楚。因為漿細胞在免疫屏障系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，本課題擬研究DHR對人漿細胞的毒副作用，為DHR的安全性評價提供新的證據(jù)。
　　研究方法：用噻唑藍（MTT）法檢測DHR是否抑制漿細胞增殖，流式細胞技術(shù)檢測DHR對漿細胞周期

2、、凋亡和線粒體膜電位的影響。免疫印跡檢測DHR對漿細胞的細胞周期蛋白、凋亡蛋白、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白和p38有絲分裂原激活蛋白激酶表達的調(diào)控。
　　研究結(jié)果：
　?。?）MTT試驗表明了DHR能以濃度依耐性的方式抑制人漿細胞存活率，免疫印跡顯示DHR下調(diào)參與G1期調(diào)控點的周期調(diào)節(jié)劑cyclin D3、CDK4/6、cyclin E和p-Rb的表達以及上調(diào)抑癌因子p53的表達，且使?jié){細胞細胞周期滯止在G0/G1期。
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3、2）流式細胞技術(shù)表明DHR能引起漿細胞的凋亡，且免疫印跡證明caspase-3、8、9以及PARP均被剪切，抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表達被下調(diào)，促凋亡蛋白Bim表達被上調(diào)。
　?。?）利用四甲基羅丹明甲酯（TMRM）染色，經(jīng)流式細胞技術(shù)表明 DHR能降低漿細胞的線粒體膜電位。
　?。?）用DHR處理漿細胞不同濃度或不同時間，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)的標(biāo)志蛋白GRP78、ATF4和CHOP均被上調(diào)。
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