新型多聚體微泡攜帶藥物舒尼替尼靶向治療腎細胞癌的離體和在體實驗研究.pdf

1、目的：化療是腫瘤治療的一個重要手段。但目前絕大多數化療藥物在發(fā)揮抑瘤作用的同時會引起機體嚴重的副作用,因而影響其最終療效。如何選擇合適的化療藥物及給藥方式,使其在體內最大程度的發(fā)揮藥理作用并盡量減少并發(fā)癥一直是醫(yī)學研究的重點。近些年發(fā)展起來的超聲介導的藥物靶向運輸治療腫瘤已成為研究的熱點問題。本實驗通過研制新型多聚體超聲微泡作為藥物載體,攜帶抗腎癌藥物舒尼替尼形成新型多聚體微泡-藥物復合體,評估離體實驗中其在超聲輻照的作用下對人腎癌GR

2、C-1細胞的增殖抑制及誘導凋亡效應,并初步探索將其應用于在體腎癌靶向治療的可行性和有效性。
　　方法：制備攜帶有藥物舒尼替尼的新型多聚體微泡,將表面活性劑Span60、Tween80以及不同聚合度的PEG溶于PBS中,向溶液內通入SF6氣體,應用高強度超聲處理得到超聲微泡,同時利用跨膜銨梯度法制備得到包含有藥物舒尼替尼的脂質體,將超聲微泡和載藥脂質體直接混合得到新型多聚體微泡-藥物復合體。采用庫爾特粒度儀檢測微泡及脂質體的粒徑分布

3、,通過Photoshop軟件進行圖像分析評估微泡濃度,通過吸光度檢測計算脂質體對藥物舒尼替尼的包封率。應用熒光膽固醇25-NBD-Cholesterol制備帶有熒光的脂質體,與微泡連接后在熒光顯微下觀察,證實脂質體在微泡表面的有效粘附。通過觀測流式細胞儀檢測中吸收曲線的變化,驗證新型多聚體微泡-藥物復合體中藥物舒尼替尼的有效加載。離體實驗中,將體外培養(yǎng)的人腎癌GRC-1細胞隨機分為6組:空白對照組(Control)、單純微泡組(MB)、

4、單純脂質體組(Lipsome)、舒尼替尼組(Sunitinib)、加載有舒尼替尼的新型多聚體微泡不聯合超聲組(pMBS-US)和加載有舒尼替尼的新型多聚體微泡聯合超聲組(pMBS+US)。通過改變各實驗組不同的藥物濃度和作用時間,應用MTT法觀察不同處理組的細胞生存率,應用Caspase-3抗體與FITC熒光共同染色法檢測細胞凋亡,應用DAPI熒光染色法觀察凋亡細胞的核變化,同時應用透射電子顯微鏡觀測凋亡細胞微結構的變化。在體實驗中,采

5、用引瘤后原代細胞培養(yǎng)注射細胞懸液法建立裸鼠RCC皮下移植瘤模型,并隨機分為空白對照組(Control)、多聚體微泡組(pMB)、單純舒尼替尼治療組(Sunitinib)和加載有舒尼替尼的新型多聚體微泡聯合超聲治療組(pMBS+US)共4組。采用體內循環(huán)體外抽檢的方法進行新型多聚體微泡-藥物復合體在體循環(huán)穩(wěn)定性的檢測,應用超聲儀實時監(jiān)測不同實驗組裸鼠腫瘤生長變化并描繪腫瘤生長曲線,同時應用Micro-CT檢測評估腫瘤的發(fā)展轉移情況,隨時觀

6、察記錄藥物舒尼替尼相關不良反應的發(fā)生。
　　結果：新型多聚體超聲微泡的平均直徑為3.17μm,濃度為3×109/mL,含藥脂質體的平均粒徑為165nm,其對舒尼替尼的包封率約為78％。熒光顯微鏡下脂質體有效粘附在微泡表面。流式細胞儀結果顯示,藥物舒尼替尼成功加載于新型多聚體微泡-藥物復合體中。離體實驗中,結果顯示載藥新型微泡復合物對人腎癌GRC-1細胞有明顯的生長抑制及促進凋亡作用,其中,pMBS+US組對該腫瘤細胞的增殖抑制及誘

7、導凋亡作用強于其他處理組及對照組,且抑制程度隨作用時間的增長和作用藥物濃度的增加而增加。在體實驗中,結果顯示載藥新型微泡復合物對裸鼠RCC有明顯的生長抑制作用,其中,pMBS+US組對該腫瘤生長的抑制作用與其余各組相比有明顯統(tǒng)計學差異,甚至優(yōu)于單純使用藥物治療。以上體內實驗的結果與體外實驗結果相對應,具有前后一致性。
　　結論：無論是體內還是體外實驗,最有效的RCC治療方案都需要新型多聚體載藥微泡、有效的藥物舒尼替尼及超聲的定點照