巴克期毛霉(Backusella circina)的生理學(xué)試驗(yàn)及培養(yǎng)基形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的:巴克斯毛霉(Backusellacircina)屬真菌門，接合菌亞門，毛霉目，廣泛分布于自然界中。毛霉目真菌是接合菌中在經(jīng)濟(jì)效益方面比較重要的一類，可分為14科，55屬，400多種，其中絕大多數(shù)分布在土壤里面、有機(jī)物及動物尸體上。在對人類致病性方面，一般為條件致病菌，當(dāng)人體發(fā)生重大疾病或惡性疾病晚期、機(jī)體抵抗力下降時侵入，引起人體淺部和深部真菌病，國內(nèi)外有關(guān)毛霉菌感染的報道近年來逐漸增多，但目前該菌引起人體感染尚無相關(guān)文獻(xiàn)報道。本

2、研究所用菌株分離自我院1例白血病患者面部皮損中，經(jīng)中國科學(xué)院微生物研究所鑒定為巴克斯毛霉。
　　 本實(shí)驗(yàn)研究一方面主要通過簡單的生理學(xué)實(shí)驗(yàn)來了解該菌的一些基本特性;另一方面通過觀察該菌四種溫度下在五種不同培養(yǎng)基上的形態(tài)學(xué)特征，尋找最適合其生長的環(huán)境溫度及培養(yǎng)基。
　　 方法:
　　 1.菌落形態(tài)學(xué)觀察
　　 1.1五種平皿培養(yǎng)基上的菌落大體形態(tài)觀察將我科保存的菌株常溫下復(fù)蘇48小時，分別接種于沙堡氏培養(yǎng)基

3、(SDA)、麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基(MEA)、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)、玉米粉瓊脂培養(yǎng)基(CMA)和察氏瓊脂培養(yǎng)基(CZA)上，分別置于27℃、32℃、37℃、40℃培養(yǎng)60小時，觀察各個溫度下菌落生長情況、測量菌落直徑。
　　 1.2小培養(yǎng)（方塊法）將巴克斯毛霉分別點(diǎn)種于以上五種培養(yǎng)基的小培養(yǎng)上，分別置于27℃、32℃、37℃和40℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)60小時，光鏡下觀察菌絲生長、產(chǎn)生孢子的情況。
　　 1.3光鏡觀察取

4、五種培養(yǎng)基上生長狀態(tài)良好的菌落標(biāo)本置于載玻片上，經(jīng)過乳酸酚棉蘭染色后，于光鏡下觀察。
　　 1.4掃描電鏡觀察取沙堡氏培養(yǎng)基(SDA)27℃下生長3天的菌落標(biāo)本，置于4％的戊二醛中固定，常規(guī)制片后在掃描電鏡下觀察其特點(diǎn)。
　　 2.生理學(xué)實(shí)驗(yàn)將菌落接種于尿素酶瓊脂培養(yǎng)基上，溫室內(nèi)培養(yǎng)4天后，觀察尿素酶瓊脂培養(yǎng)基顏色的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.五種培養(yǎng)基菌株的大體形態(tài)學(xué)的觀察五種培養(yǎng)基上27℃、32℃

5、、37℃三個溫度下均有菌落生長，菌落均為蓬松的白色羊毛狀，在40℃下菌落生長極緩慢，部分平皿內(nèi)不生長。菌株在SDA、MEA、PDA三種培養(yǎng)基上，菌落都有生長，菌落生長速度，均快于同一溫度下CMA和CZA上的生長速度，在同一溫度下SDA培養(yǎng)基上生長最快。
　　 2.在五種培養(yǎng)基上菌落直徑巴克斯毛霉在五種培養(yǎng)基上均有生長，生長速度與時間成正比。同一溫度下菌落在不同培養(yǎng)基上直徑比較，有顯著性差異(P＜0.05)(Table1)，每種培

6、養(yǎng)基的直徑用均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差顯示(Table2，3，4)，SDA上生長最快。同一種培養(yǎng)基上在27℃和32℃時菌落直徑無顯著性差異(P＞0.05)(Table6)，27℃和32℃分別與37℃、40℃相比較時，有顯著性差異(P＜0.05)(Table6)，40℃下菌落幾乎不生長（未測量其生長直徑）。
　　 3.光鏡下觀察可見大量發(fā)達(dá)無橫隔菌絲及其頂端膨大形成的孢子囊，部分孢子囊聚集成團(tuán)，菌絲表面比較光滑，可見少量側(cè)生菌絲，低倍鏡下偶見少

7、量菌絲末端有假根形成，并且可見單個、或聚集成堆大小不等圓形孢子，并可見少量蝌蚪狀出芽孢子。
　　 4.生理學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)蛩孛笇?shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。
　　 5.掃描電鏡下觀察可見豐富的分枝無分隔菌絲，較寬，結(jié)構(gòu)差異較大，菌絲粗細(xì)不均勻，一般直徑約為2～6um，圓形孢子囊外周呈放射刺狀疣結(jié)構(gòu)，疣之間相互無連接，孢子呈圓形，直徑約為1.5～3um，這是該菌的特征性表現(xiàn)。
　　 結(jié)論:
　　 1.巴克斯毛霉在各個溫度下菌落只有