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1、目的:
本研究通過(guò)Rho激酶抑制劑—法舒地爾對(duì)TGF-β1體外刺激下尿道成纖維細(xì)胞的增殖、細(xì)胞外基質(zhì)合成以及參與尿道疤痕收縮的細(xì)胞骨架運(yùn)動(dòng)相關(guān)蛋白,如α-肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、磷酸化肌球蛋白輕鏈(myosin light chain phosphorylation,p-MLC)、LIM激酶1(LIMkinase,LIMK-1)、磷酸化絲切蛋白(Cofilin phosphorylation,p-Cofilin),以及I和II
2、I膠原蛋白的影響,進(jìn)一步揭示尿道瘢痕發(fā)病機(jī)理,為各種纖維化疾病的發(fā)病機(jī)制提供新的理論和方法。
方法:
取原代人尿道瘢痕成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分成8個(gè)組,培養(yǎng)液中分別加入TGF-β1(10ng/ml),法舒地爾(12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L),TGF-β1(10ng/ml)+法舒地爾(12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L)以及正常對(duì)照組。用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力;用流
3、式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率;用Western-blot檢測(cè)各組α-SMA、p-MLC、LIMK-1、p-Cofilin,以及I和III膠原蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:
TGF-β1能顯著增加尿道成纖維細(xì)胞活力,能誘導(dǎo)α-SMA、p-M LC、LIMK-1、p-Cofilin,以及I和III膠原蛋白的表達(dá),且隨TGF-β1濃度的升高其誘導(dǎo)作用呈逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)。隨著法舒地爾干預(yù)濃度增加,尿道成纖維細(xì)胞活力減弱;α-SMA、p-MLC
4、、LIMK-1、p-Cofilin,以及I和III膠原蛋白的表達(dá)下降;流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示在無(wú)TGF-β1作用下,較高濃度法舒地爾組早期凋亡率高于對(duì)照組(P<0.05);而加入TGF-β1作用下,法舒地爾對(duì)尿道成纖維細(xì)胞早期凋亡有明顯的濃度依賴性。
結(jié)論:
法舒地爾可能通過(guò)Rho/Rock信號(hào)通路抑制TGF-β1誘導(dǎo)的人尿道成纖維細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化和分泌細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)等生物學(xué)行為,并誘導(dǎo)其早期凋亡。使細(xì)胞骨架運(yùn)動(dòng)相
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