基質(zhì)金屬蛋白酶處理豬脫細(xì)胞真皮基質(zhì)移植后組織學(xué)觀察及其血管化評(píng)價(jià).pdf

1、目的:
　　本課題組前期在改進(jìn)豬皮取材、制作網(wǎng)織層真皮、優(yōu)選脫細(xì)胞方法制備出P-ADM的基礎(chǔ)上，選用適宜濃度的MMP-7處理，有效減少了基質(zhì)中的細(xì)胞碎片、ColⅣ、LN等高免疫原性成分，制備出既保持支架正常組織結(jié)構(gòu)，又相對(duì)擴(kuò)大其三維網(wǎng)絡(luò)空間的P-ADM-pm(P-ADM processed with MMP-7)。本研究將P-ADM-pm植入大鼠皮下并以P-ADM作為對(duì)照，觀察比較其宿主細(xì)胞、血管浸潤(rùn)及組織學(xué)變化，探討該真皮支架在

2、真皮重建中可能的作用機(jī)制，為其進(jìn)一步的改進(jìn)及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)佐證。
　　方法:
　　取健康雄性50kg白色家豬邊腹部皮膚，機(jī)械法制作0.5-0.6mm厚網(wǎng)織層真皮，切取1.0cm×1.5cm網(wǎng)織層真皮62塊，隨機(jī)分為脫細(xì)胞組（P-ADM組，A組）和脫細(xì)胞+MMP-7處理組（P-ADM-pm組，B組）;隨機(jī)取P-ADM和P-ADM-pm各1塊行抽樣檢測(cè)。取成年雄性Wistar大鼠30只，每只大鼠背部皮下分別植入P-A

3、DM和P-ADM-pm。分別于移植術(shù)后3、7、14、21、28d隨機(jī)取6只大鼠取材，行大體、HE染色、Masson染色、免疫組化染色、掃描電鏡和透射電鏡觀察，分析比較移植物宿主細(xì)胞、血管浸潤(rùn)及組織學(xué)變化。
　　結(jié)果:
　　(1)抽樣檢測(cè)P-ADM毛囊內(nèi)毛發(fā)、上皮根鞘、細(xì)胞核、細(xì)胞碎片樣結(jié)構(gòu)及波形蛋白(Vimentin)、層粘連蛋白(LN)、Ⅳ型膠原蛋白(ColⅣ)仍有少量殘留，P-ADM-pm被基本去除。兩組膠原纖維結(jié)構(gòu)完整

4、，P-ADM-pm膠原纖維束及膠原纖維之間間隙較P-ADM增大。
　　(2)移植術(shù)后7d，肉眼觀兩組移植物表面均形成一層布有少量微血管的纖維薄膜，隨術(shù)后時(shí)間微血管增加、變粗并浸潤(rùn)移植物，B組較A組明顯，術(shù)后21d三組纖維薄膜微血管減少、增粗，B組移植物整體呈粉紅色表現(xiàn)。
　　(3)移植術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)，鏡下觀A組移植物呈現(xiàn)較重炎性反應(yīng)，14d以后宿主炎性細(xì)胞浸潤(rùn)之處膠原纖維形態(tài)結(jié)構(gòu)出現(xiàn)裂解等破壞性改變;B組炎性反應(yīng)輕，宿主細(xì)胞尤