泡盛曲霉β-1,3-1,4-葡聚糖酶的發(fā)酵條件優(yōu)化、純化、性質(zhì)及應(yīng)用研究.pdf

1、β-1,3-1,4-葡聚糖酶在啤酒釀造、飼料生產(chǎn)和生化防治等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。本文從土壤中分離、篩選和鑒定了一株高產(chǎn)β-1,3-1,4-葡聚糖酶的真菌，并通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化其固體和液體發(fā)酵產(chǎn)酶條件，并從液體發(fā)酵液中提取純化出一種β-1,3-1,4-葡聚糖酶，同時(shí)研究了該酶的性質(zhì)及應(yīng)用。得到的主要結(jié)論如下：
　?。?）從土壤中篩選出一株高產(chǎn)β-1,3-1,4-葡聚糖酶的真菌，經(jīng)菌落形態(tài)、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和ITS基因序列

2、比對(duì)，初步鑒定為泡盛曲霉種，命名為泡盛曲霉CAU33。采用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法優(yōu)化泡盛曲霉CAU33固體、液體發(fā)酵的產(chǎn)酶條件，得到的最佳固體發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基條件：啤酒糟為碳源，含水量80％，吐溫6010 g/L，大豆蛋白胨25 g/L，pH自然，35℃下培養(yǎng)5 d，在優(yōu)化后的發(fā)酵條件下，最高產(chǎn)酶水平達(dá)到38452 U/g干基，是目前報(bào)道的野生菌株固體發(fā)酵產(chǎn)酶最高酶活力值。得到的最佳液體發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基條件：玉米芯5.5%，蛋白胨2.5%，曲

3、拉通X-1142.3%，KH2PO40.5%， MgSO4·7H2O0.03%，CaCl20.03%，在優(yōu)化后的發(fā)酵條件下，35℃培養(yǎng)6 d，達(dá)到最大產(chǎn)酶水平為8446.9 U/mL，比優(yōu)化前提高了17.6倍，是目前報(bào)道的野生菌株液體發(fā)酵產(chǎn)酶最高酶活力值。
　?。?）泡盛曲霉CAU33液體發(fā)酵粗酶液經(jīng)過硫酸銨沉淀、QSFF強(qiáng)陰離子柱層析和DE52弱陰離子柱層析三種方法得到了電泳級(jí)純酶，其中純化倍數(shù)為10.5倍，回收率為22.1%，

4、比酶活力由1432.19 U/mg提高到了15084.86 U/mg。酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定結(jié)果表明該酶最適pH和最適溫度分別為pH5.5和55℃，具有極強(qiáng)的耐酸性和廣泛的pH穩(wěn)定性。該酶特異性水解β-1,3-1,4-葡聚糖，不能水解β-1,3-葡聚糖或β-1,4-葡聚糖，水解大麥β-葡聚糖時(shí)，水解產(chǎn)物為三糖和四糖；水解地衣多糖時(shí)，產(chǎn)物為三糖。該酶對(duì)麥芽糖化的影響表明，當(dāng)酶的添加量為70 U/g麥芽時(shí)，麥芽汁粘度減少5.25%，過濾速度提高28%