P73和MDM2基因多態(tài)性與卵巢上皮性癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:卵巢癌是婦科惡性腫瘤死亡的最常見(jiàn)的病因,其中90％是卵巢上皮性癌。卵巢上皮性癌因發(fā)病隱匿,進(jìn)展迅速,約有70％的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬晚期,5年生存率僅為25％～30％。有研究顯示,遺傳易感性可能在卵巢癌的發(fā)生中起重要作用。因此,尋找易感基因,確立高危人群,實(shí)現(xiàn)早期診斷是提高卵巢癌生存率的有效途徑。近年來(lái),p73和MDM2(murinedouble minute2)作為腫瘤候選基因,已成為人們研究的熱點(diǎn)。
　　 p73是一種候選的

2、抑癌基因,在調(diào)控細(xì)胞周期和維持細(xì)胞穩(wěn)定等方面具有重要作用,其第二外顯子非編碼區(qū)存在兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotide polymorphisms,SNPs)(G4C14/A4T14),可以形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)而影響基因表達(dá)。而MDM2是一種原癌基因,也是p73重要的負(fù)調(diào)節(jié)因子,通過(guò)抑制。P73的轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)而減弱其功能。鑒于p73、MDM2在細(xì)胞周期控制和凋亡中的相互作用,本研究旨在探討p73和MDM2基因單核苷酸多態(tài)性(SNP

3、s)與卵巢上皮性癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系,從分子水平為卵巢癌的預(yù)防和診治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:采用基于醫(yī)院的病例-對(duì)照研究方法,以257例卵巢上皮癌患者和257例健康志愿者婦女(對(duì)照組)為研究對(duì)象,采集所有研究對(duì)象的外周靜脈血5 ml,以枸櫞酸鈉抗凝,采用蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取白細(xì)胞DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragmen

4、t length polymorphism,PCR-RFLP).方法對(duì)p73 G4C14/A4T14、MDM2309T/G和MDM2Del1518+/-這3個(gè)SNPs位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。
　　 數(shù)據(jù)分析采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。對(duì)照組基因型頻率分布行x2檢驗(yàn)做Hardy-Weinberg平衡分析。病例組與對(duì)照組的年齡差異采用t檢驗(yàn),基因型和等位基因頻率分布比較采用x2檢驗(yàn),以非條件logistic回歸方法計(jì)算相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度

5、的比值比(odds ratio,OR)及其95％可信區(qū)間(confidence interval,CI)。采用EH軟件分析MDM2309T/G和MDM2Dell518+/-基因單體型頻率,21d軟件分析連鎖不平衡狀態(tài)。采用似然比檢驗(yàn)(likelihood ratio test)分析p73和MDM2基因之間的交互作用。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1對(duì)照組p73 G4C14/A4T14和MDM23

6、09T/G,Dell518+/-多態(tài)的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(x2=0.00,1.00和O.64,所有P值＞0.05)。
　　 2卵巢癌組和對(duì)照組中,p73 G4C14/A4T14多態(tài)的基因型和等位基因分布頻率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.20和P=0.55)。與GC/AT+AT/AT基因型比較,GC/GC基因型與卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān),OR值為1.24(95％CI=0.87～1.77)。以病理類型、臨床分

7、期或確診時(shí)年齡分層分析,p73 G4C14/A4T14多態(tài)的基因型頻率在各組間的分布差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均大于0.05)。
　　 3 MDM2309T/G的3種基因型頻率(T/T、T/G、G/G)在卵巢癌組和對(duì)照組中分別是30.0％、46.7％、23.3％和21.8％、47.1％、31.1％,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.046)。卵巢癌組中的MDM2309T/G SNP的G等位基因頻率(46.7％)明顯低于對(duì)照組(54

8、.7％),兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01)。與T/T基因型相比,攜帶G等位基因型(T/G+G/G基因型)可顯著降低卵巢上皮癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.65,95％CI=0.44～0.97)。以病理類型,臨床分期和確診年齡分層分析發(fā)現(xiàn),攜帶G等位基因型(T/G+G/G基因型)可明顯降低內(nèi)膜樣癌,晚期卵巢癌和50歲以上的卵巢癌病人的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.53,95％CI=0.31～0.90;OR=0.62,95％CI=0.40～0.97;

9、OR=0.59,95％CI=0.38～0.92)。
　　 4 MDM2 Del1518+/-SNP的基因型和等位基因頻率在病例組和對(duì)照組中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.68和P=0.45)。與(+/-)+(-/-)基因型相比,+/+基因型與卵巢上皮癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)(OR=1.17,95％CI=0.83～1.65)。但以病理類型、臨床分期和發(fā)病年齡分層分析顯示,攜帶MDM2 Del1518+/+基因型有增加黏液性卵巢癌和早期卵巢

10、癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢(shì)(OR=2.01,95％CI=0.93～4.37;OR=1.64,95％CI=0.99～2.72),而與發(fā)病年齡無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。
　　 5采用21d軟件對(duì)MDM2309T/G和Del1518+/-兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行聯(lián)合分析,結(jié)果顯示兩個(gè)位點(diǎn)間存在部分連鎖不平衡現(xiàn)象(D=0.57,P=0.00)。而采用EH軟件對(duì)MDM2309T/G和Del1518+/-兩位點(diǎn)SNPs進(jìn)行單體型分析顯示,雖然4種單體型(+1518/T30

11、9,+1518/G309,-1518/T309和-1518/G309)頻率在卵巢癌組與對(duì)照組中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.07),但與+1518/T309單體型相比,+1518/G309和-1518/G309單體型均可明顯降低卵巢上皮性癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.73,95％CI=0.55～0.98;OR=0.65,95％CI=0.45～0.96)。
　　 6采用似然比檢驗(yàn)分析p73 G4C14/A4T14 SNP與MDM230

12、9T/G、Del1518+/-2個(gè)SNPs之間的基因.基因交互作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),p73G4C14/A4T14與MDM2309T/G之間有明顯的交互作用(P=0.03,OR=0.89,95％CI=0.80～0.99);而p73 G4C14/A4T14與Del1518+/-之間無(wú)明顯交互作用(P=0.36)。與GC/GCp73 G4C14/A4T14-T/TMDM2309T/G基因型相比,攜帶(GC/AT+AT/AT)p73 G4C14/A4

13、T14-(T/G+G/G)MDM2309T/G基因型可明顯降低卵巢上皮性癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.55,95％CI=0.31～0.98)。
　　 結(jié)論:
　　 1 p73 G4C14/A4T14的基因多態(tài)性可能與卵巢上皮性癌遺傳易感性無(wú)關(guān)。
　　 2攜帶MDM2309T/G多態(tài)的G等位基因型可能顯著降低卵巢上皮性癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),并與卵巢上皮性癌的病理類型、臨床分期及確診年齡有顯著關(guān)聯(lián),因此,309G等位基因可能是卵巢

14、上皮性癌發(fā)病的一個(gè)潛在的保護(hù)因素。
　　 3 MDM2 Del1518+/+基因型有增加黏液性卵巢癌和早期卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的趨勢(shì),而與發(fā)病年齡無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。
　　 4 MDM2309T/G和Del1518+/-兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)間存在部分連鎖不平衡現(xiàn)象,+1518/G309和-1518/G309單體型均可明顯降低卵巢上皮性癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　 5 p73 G4C14/A4T14與MDM2309T/G之間有明顯交互作用,而p