bFGF，缺血預處理對帶真皮下血管網皮片周緣血運建立的研究.pdf

1、目的：觀察堿性成纖維細胞生長因子bFGF和缺血預處理聯(lián)合應用于SD大鼠帶真皮下血管網皮片對細胞增殖，血管化進程，以及皮片成熟面積的影響。皮膚移植是手外科主要治療方法之一，移植皮片成功的基礎是皮片與受皮區(qū)之間的血運建立，而血管形成(即組織中新生血管的增殖和形成過程)是構建這種血運關系的基礎和關鍵。缺血預處理和bFGF可以加速植皮區(qū)與受皮區(qū)之間的血運建立，提高皮片移植的成活率，對解決帶真皮下血管網皮片移植后因皮片較厚，從供區(qū)獲得血供的時間較

2、長，較困難，常出現局灶性表皮層或真皮層壞死，散在的水皰干枯脫痂后形成花斑等問題有積極意義。bFGF(堿性成纖維細胞生長因子)是人體內最為有效的血管形成因子之一，是成纖維細胞、血管內皮細胞及血管平滑肌細胞的高效促生長劑，能夠強烈促進新生毛細血管的形成，改善創(chuàng)面微循環(huán)，為組織修復提供所必須的氧和豐富的營養(yǎng)物質。缺血預處理引起的皮片保護作用會立即產生并可維持24小時，加強了細胞對缺血的耐受能力，從而引發(fā)了缺血預處理的保護效應。本實驗主要是通過

3、研究帶真皮下血管網皮片基底血運被阻斷時皮片成活和邊緣血運的建立情況，為臨床提高帶真皮下毛細血管網皮片移植的成功率提供實驗依據和臨床依據。 方法：將40只健康SD大鼠隨機分為A、B、C、D四組。A組為對照組，B組為缺血預處理組，C組為缺血預處理加生理鹽水組，D組為缺血預處理加bFGF組。A組：鼠背脫毛、消毒，取1×1cm2，2×2cm2，3×3cm2正方形皮片，間距3厘米。帶真皮下血管網皮片的形成過程如下：逐層切開皮膚、皮下組織，

4、于深筋膜淺面將皮片掀起，創(chuàng)面徹底止血，用眼科剪修去皮片的大部分皮下組織，保留皮下脂肪約1.5～3mm(包括背部肉膜層，在背部肌膜的淺面進行)，皮片基底與受皮區(qū)基底塞入片狀硅膠膜以阻斷基底血供，將皮片對邊扭轉180度，直接原位縫合；B組：設計皮片同A組，皮片切取時，僅切透皮片四邊，于術后72小時再徹底游離皮片基底部，并掀起皮片，皮片基底與受皮區(qū)基底塞入片狀硅膠膜以阻斷基底血供，原位縫合；C組：設計皮片同A組，分別切透己設計好的皮片四邊，于

5、術后72小時后游離基底部，皮片基底與受皮區(qū)基底塞入片狀硅膠膜以阻斷基底血供，以生理鹽水浸泡皮片及受區(qū)周緣軟組織，原位縫合皮片；D：皮片設計同A組，分別切透已設計好的皮片四邊，術后72小時游離基底部，于皮片及受區(qū)創(chuàng)面周緣軟組織內應用堿性成纖維細胞生長因子溶液36000AU/15mL bFGF浸泡10min后，皮片基底與受皮區(qū)基底塞入片狀硅膠膜以阻斷基底血供，原位縫合，7天后觀察皮片的各項指標。觀察指標：1、觀察皮片的顏色、質地、彈性和邊緣

6、滲血情況。2、皮片成活面積：皮片形成后第1周，數碼相機記錄圖像分析測量皮片成活部分的最長徑、最寬徑，面積及面積成活百分比。3組織學觀察：于創(chuàng)緣周邊取病理切片，HE染色，于等寬的面積內隨機選取5個高倍鏡視野，計算新生血管的數量及肉芽組織增生情況進行顯微鏡下觀察及數據測量。 結果：大體觀察：40只SD大鼠術后全部喂養(yǎng)成活，以皮片質地變硬、失去彈性、顏色變黑為判斷皮片壞死的標準，測量皮片成活面積。切取范圍為1cm2大小的各組皮片幾乎完

7、全成活，四組皮片成活面積和成活部分平均寬度無明顯差異；4cm2和9cm2大小的各組皮片均出現中心部分不同程度的壞死，表皮部分壞死剝脫，皮膚色黑、質硬，失去彈性，皮片四邊周緣出現寬度不等不規(guī)則的成活區(qū)，色澤稍暗，質地彈性可，四個處理組皮片成活面積和成活部分平均寬度均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，Q檢驗結果顯示：除B組與C組比較無差別外，其余各組間比較均有差別。D組皮片成活面積明顯高于A、B、C三組，B、C兩組皮片成活面積高于A組。組織學觀

8、察：(1)四組皮片壞死區(qū)組織學形態(tài)相似，均表現為急性炎癥，中性粒細胞、單核細胞浸潤，肌層壞死；(2)各組皮片成活區(qū)表現：A組帶真皮下血管網皮片皮膚組織層次破壞嚴重，大量中性粒細胞及單核細胞浸潤，可見少量萎縮血管，罕見新生毛細血管，B、C組真皮深層可見少量毛細血管，管腔較大，管壁完整性較好，D組皮片成活區(qū)新生血管密度、肉芽組織形成均明顯高于其它組，血管增生明顯，全層炎性細胞浸潤較其它組輕，大量肉芽組織形成，大量新生血管，新生血管主要表現為

9、毛細血管。當帶真皮下血管網皮片切取范圍1cm2時，四組皮片新生毛細血管數量無明顯差異。當帶真皮下血管網皮片切取范圍為4cm2和9cm2時，四個處理組均有統(tǒng)計學意義，Q檢驗結果顯示：除B組與C組比較無差別外，其余各組間比較均有差別。D組皮片成活部分新生毛細血管數量明顯高于A、B、C三組，B、C兩組皮片新生毛細血管數量高于A組。 結論： (1)帶真皮下毛細血管網皮片應用bFGF浸泡后肉芽組織增生明顯，增加了肉芽組織及移植皮片

10、中血管的數量，說明bFGF對肉芽組織中成纖維細胞、血管內皮細胞、平滑肌細胞等的增殖與分化有促進作用，為肉芽組織的生長、皮片的成活愈合提供了較好的營養(yǎng)環(huán)境，為移植皮片的成活愈合提供了基礎。 (2)帶真皮下血管網皮片經過缺血預處理后，加強了細胞的耐缺血能力，并可以使皮片周緣形成更多的新生毛細血管，加快毛細血管化的進程，從而加快肉芽組織的生長速度。 (3)通過本實驗觀察表明帶真皮下血管網皮片基底血運被阻斷時，依靠邊緣血管吻接的