核方法中的最優(yōu)核選擇問(wèn)題研究.pdf

1、鮑曼不動(dòng)桿菌廣泛分布于自然界,可從環(huán)境、人類皮膚和粘膜中分離出來(lái)。鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)濕熱、紫外線、化學(xué)消毒劑有較強(qiáng)抵抗力,常規(guī)消毒劑只能抑制其生長(zhǎng),不能將其殺滅。它可在病人中播散并引起醫(yī)院內(nèi)感染。近年來(lái),隨著各種抗生素,尤其是廣譜頭孢菌素和碳青霉烯類藥物在臨床的廣泛使用,在抗生素的選擇壓力下,經(jīng)常能分離到多耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌,甚至是泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌,耐藥率也呈逐漸上升趨勢(shì),因此受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者格外關(guān)注。在很多地區(qū),已廣泛報(bào)道多耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌

2、所致的院內(nèi)感染出現(xiàn)爆發(fā)流行,泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌引起的醫(yī)院感染已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題。2010年9月,Kumarasamy報(bào)告,在印度、巴基斯坦和英國(guó)發(fā)現(xiàn)一些革蘭氏陰性細(xì)菌含有“耐藥基因”(新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶New Delthi Metallo-beta-Lactamase,也稱NDM-1),對(duì)碳青霉烯類發(fā)生耐藥,并可在細(xì)菌中或菌種間廣泛復(fù)制和傳播,被稱為“超級(jí)細(xì)菌”。在日本,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)鮑曼不動(dòng)桿菌攜帶NDM—1基因。鮑曼不動(dòng)桿菌

3、多耐藥的機(jī)制,包括有外膜孔蛋白異常、外排泵功能變化及特異的耐藥基因盒通過(guò)可移動(dòng)遺傳元件的介導(dǎo)后出現(xiàn)變異和傳播。可移動(dòng)遺傳元件包括整合子、轉(zhuǎn)座子、插入序列。整合子的水平轉(zhuǎn)移提示耐藥基因的擴(kuò)散及多耐藥菌株的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)座子可介導(dǎo)各種耐藥基因。插入序列能促進(jìn)目的基因的表達(dá)。國(guó)內(nèi)關(guān)于外排泵mdfA基因及整合子、轉(zhuǎn)座子的研究不多,尚無(wú)插入序列ISaba4、ISaba9的研究。對(duì)碳青霉烯類耐藥的機(jī)制包括有;產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶,青霉素結(jié)合蛋白改變,外膜蛋白缺

4、失及外排泵增強(qiáng)。細(xì)菌產(chǎn)碳青霉烯酶是引起耐藥的主要因?yàn)?。目?國(guó)外關(guān)于鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類耐藥情況的分析及耐藥機(jī)理的研究較多；但同時(shí)檢測(cè)B類和D類碳青霉烯酶基因以及CarO基因,國(guó)內(nèi)在這方面的研究相對(duì)較少。
　　 目的：通過(guò)檢測(cè)鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)常用抗菌藥物和新藥替加環(huán)素的體外抗菌活性,了解鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥特點(diǎn),為臨床抗菌藥物的選擇提供依據(jù)。檢測(cè)可移動(dòng)遺傳元件、化合物外排泵基因在多耐藥菌株中的存在狀況,有助于分析鮑曼不動(dòng)桿菌的多

5、耐藥機(jī)制。研究多耐藥菌株對(duì)碳青霉烯類耐藥的分子機(jī)制,為指導(dǎo)臨床用藥,降低細(xì)菌的耐藥率和傳播建立基礎(chǔ)。
　　 方法：2007年8月至2010年3月,從中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院住院患者的痰液、血液、尿液、膽汁、膿液等標(biāo)本中分離所得細(xì)菌,獲得純培養(yǎng)后,經(jīng)革蘭染色、氧化酶試驗(yàn)等初篩,采用全自動(dòng)微生物鑒定儀鑒定菌株,收集共52株鮑曼不動(dòng)桿菌。用瓊脂紙片擴(kuò)散法測(cè)定鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)13種抗菌藥物的敏感性,包括頭孢西丁,頭孢噻肟,頭孢他啶,頭孢吡肟,

6、氨曲南,阿米卡星,慶大霉素,環(huán)丙沙星,哌拉西林/他唑巴坦,多粘菌素B,亞胺培南,頭孢哌酮/舒巴坦,替加環(huán)素。選取耐亞胺培南的多耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌20株,采用PCR及序列分析的方法分析碳青霉烯酶基因(IMP、VIM、SIM、SPM、GIM、AIM、NDM、OXA-20、OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58),膜孔道蛋白基因(CarO),化合物外排泵基因(mdfA、smr-2)、可移動(dòng)遺傳元件(tnpU、tnp513、ISa

7、ba1、ISaba4、ISaba9、qacEΔ1、intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3)。
　　 結(jié)果：⑴鮑曼不動(dòng)桿菌標(biāo)本來(lái)源為:痰液44份(84.6％),皮膚分泌物4份(7.7％),尿液2份(3.8％),血液1份(1.9％),膽汁1份(1.9％)。⑵病區(qū)分布:ICU15(28.8％),神經(jīng)外科13(25％),肝膽外科7(13.5％),胸外科4例(7.7％),胃腸外科3例(5.8％),骨科、神經(jīng)內(nèi)科、腎內(nèi)科各有2例,皮膚科、消化內(nèi)

8、科、呼吸內(nèi)科、介入科各有1例。⑶藥敏結(jié)果:鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)多粘菌素B、亞胺培南、頭孢哌酮/舒巴坦、替加環(huán)素的耐藥率分別為7.7％、53.8％、57.7％、36.5％,敏感率82.7％、46.2％、21.2％、23.1％；對(duì)頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢吡肟、氨曲南、阿米卡星、慶大霉素、環(huán)丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦等9種抗菌藥物耐藥率均大于75％。多耐藥菌是51株(98.1％),泛耐藥菌7株(13.5％),菌株77053是一株超級(jí)耐藥菌

9、,對(duì)所有檢測(cè)的藥物均耐藥。⑷選取多耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌20株,檢測(cè)化合物外排泵基因mdfA均為陽(yáng)性,陽(yáng)性率為100.0％,沒(méi)有檢出smr-2?？梢苿?dòng)遺傳元件基因tnpU、tnp513、ISaba1、intⅠ1、qacEΔ1均為陽(yáng)性,陽(yáng)性率為100.0％。沒(méi)有檢出ISaba4、ISaba9、intⅠ2、intⅠ3。⑸選取20株對(duì)亞胺培南耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌,進(jìn)行12種碳青霉烯酶基因檢測(cè),有13株菌OXA-23群基因呈陽(yáng)性,陽(yáng)性率為65.0％,O

10、XA-20、OXA-24、OXA-51、OXA-58基因檢測(cè)均為陰性；金屬酶IMP、VIM、SIM、SPM、GIM、AIM、NDM,均未檢測(cè)出。外膜孔蛋白CarO基因檢測(cè)均陽(yáng)性,陽(yáng)性率為100.0％。
　　 結(jié)論：①鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)頭孢菌素、氨基糖苷類、喹諾酮類均呈很高的耐藥率；碳青霉烯類藥物可考慮用于治療鮑曼不動(dòng)桿菌感染；其次是頭孢哌酮/舒巴坦。②攜帶可移動(dòng)遺傳元件,是耐藥基因互為傳播的主要因素,應(yīng)引起重視。其中ISaba4、I