三個新基因的代謝功能及結構研究.pdf

1、第一部分短期胰島素泵強化治療對初發(fā)2型糖尿病患者血漿Vaspin水平的影響
　　目的：觀察短期胰島素泵強化治療對于初發(fā)2型糖尿病(Type2diabetesmellitus，T2DM)患者的血漿內臟脂肪組織來源的絲氨酸蛋白酶抑制劑(Visceraladiposetissue-derivedserineproteaseinhibitor，Vaspin)水平的影響，探討其與胰島素敏感性的關系。
　　方法：30例初發(fā)T2DM患者(

2、T2DM組)使用胰島素泵強化治療2周，采用高胰島素-正葡萄糖鉗夾術評價治療前后的胰島素敏感性，并用酶聯免疫法測定血漿Vaspin水平及代謝相關指標。
　　結果：T2DM患者組（T2DM）空腹血漿HOMA-IR、Vaspin水平高于正常糖耐量組(Normalglucosetolerance,NGT)和糖調節(jié)受損組(Impairedglucoseregulation，IGR)。經胰島素泵強化治療后，T2DM組M值升高(2.99±0.4

3、2vs5.10±0.51mg·kg-1·min-1,P<0.05)，HOMA-IR降低[4.28(1.70~6.47)vs2.30(1.09~7.20),P<0.05]，血漿Vaspin水平也顯著降低(1.83±0.55vs1.19±0.57ng/ml,P<0.05),并且血漿Vaspin水平的降低與HOMA-IR的改變呈明顯正相關。
　　結論：胰島素泵強化治療可有效改善T2DM患者的胰島素敏感性，降低血漿Vaspin水平；并且T

4、2DM患者胰島素敏感性與血漿Vaspin水平有關。
　　第二部分TSLC1基因過表達對小鼠肝臟和脂肪細胞糖-脂代謝的影響
　　目的：探討肺癌腫瘤抑制物-1（Tumorsuppressorinlungcancer-1，TSLC1）基因過表達對小鼠肝細胞Hepa1-6和脂肪細胞3T3-L1糖-脂代謝相關基因的影響。
　　方法：擴增小鼠TSLC1基因編碼區(qū)并構建pIRES2-EGFP-TSLC1過表達載體。將上述重組載體分別

5、轉染小鼠Hepa1-6肝細胞和3T3-L1脂肪細胞。采用實時熒光定量PCR技術檢測各組細胞內TSLC1基因mRNA表達，以及糖-脂代謝相關轉錄因子FAS，ACC，HSL，ATGL，GLUT1和GLUT4的mRNA表達變化。
　　結果：轉染pIRES2-EGFP-TSLC1重組質粒的肝臟和脂肪細胞內TSLC1基因表達均顯著升高(P<0.05)。在TSLC1基因過表達的小鼠肝細胞中，FAS(P<0.01)和ACC(P<0.05)表達降

6、低，ATGL表達增加(P<0.05)；而TSLC1過表達對肝細胞內HSL、GLUT1和GLUT4的表達無顯著影響。在TSLC1基因過表達的脂肪細胞中，ATGL表達增加(P<0.05)，但FAS、ACC、HSL、GLUT1和GLUT4的表達均無顯著改變。
　　結論：成功構建小鼠TSLC1基因過表達載體。TSLC1過表達在肝細胞和脂肪細胞中可能主要通過調節(jié)ATGL表達從而影響脂質分解。在肝細胞內，TSLC1過表達還可能通過影響FAS、

7、ACC表達從而調控肝細胞內脂質合成和脂肪酸β氧化，最終減少細胞內脂質蓄積。
　　第三部分人類新基因EOLA1核心啟動子的初步鑒定
　　目的：查找人類新基因內皮高表達脂多糖相關因子-1（Endothelial-overexpressedlipopolysaccharide-associatedfactor1，EOLA1）核心啟動子的位置，為確定其轉錄起始位點，進一步研究其功能及轉錄調控提供基礎。
　　方法：針對人類EOL

8、A1基因5’-端上游可能包含啟動子序列的不同區(qū)域，采用PCR技術分別擴增4條缺失片段，分別將上述片段克隆至雙熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic，以構建pGL3-Basic-F1，F2，F3，F4重組載體，并使用雙酶切及DNA測序法對重組載體進行鑒定，將鑒定克隆正確的重組載體分別轉染人臍靜脈血管內皮細胞（Humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC）。運用雙熒光素酶報告基因檢測系統驗證各片段的螢火蟲

9、熒光素酶活性（M1）和海腎熒光素酶（M2）活性比值。
　　結果：克隆出4條目的片段，并克隆至pGL3-Basic載體后，經DNA測序驗證，重組載體構建成功。重組載體轉染HUVEC細胞后，測得M1/M2值結果顯示pGL3-Basic-F1、F3和F4組均高于對照組（P<0.05），其中pGL3-Basic-F3組最高。
　　結論：成功構建重組熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic-F1、F2、F3和F4。雙熒光素酶活性檢測提