核仁管狀系統(tǒng)、GPR30、ERα、Erβ和PR在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析.pdf

1、多囊卵巢綜合征（Polycystic Ovary Syndrome，PCOS）是育齡期婦女最常見的一種婦科內(nèi)分泌疾病，是引起不孕的主要原因之一。PCOS患者常常表現(xiàn)為排卵障礙，有自主排卵的PCOS患者妊娠率也較正常婦女低下，在促排卵助孕治療時出現(xiàn)了高排卵率與低妊娠率并存的現(xiàn)象，可能是由于子宮內(nèi)膜容受性下降所致。PCOS不孕癥患者，多次促排卵治療失敗后，最終往往借助于體外受精一胚胎移植（In vitro fertilization-emb

2、ryo transfer，IVF）解決生育問題。此時，子宮內(nèi)膜容受性直接決定了良好的胚胎到達宮腔后是否能夠成功種植，因此子宮內(nèi)膜容受性已經(jīng)引起眾多學(xué)者的關(guān)注。傳統(tǒng)的雌孕激素受體對著床期子宮內(nèi)膜的影響一直是研究的熱點。近年來，核仁管狀系統(tǒng)（nucleolar channel system，NCS）作為評價子宮內(nèi)膜容受性的形態(tài)學(xué)指標(biāo)已經(jīng)引起學(xué)者們的注意。G蛋白偶聯(lián)受體（G protein-Coupled Receptor30，GPR30）是

3、一種新型雌激素受體，其在子宮內(nèi)膜方面的研究剛剛起步，與子宮內(nèi)膜容受性關(guān)系的研究尚未開展。本文以PCOS患者植入窗期的子宮內(nèi)膜為研究對象，從形態(tài)學(xué)、超聲學(xué)、分子生物學(xué)和內(nèi)分泌學(xué)四個方面對子宮內(nèi)膜容受性進行論述，探索PCOS患者妊娠率較正常育齡期婦女低下的原因，為PCOS不孕癥患者的助孕治療提供理論依據(jù)。
　　 本研究分兩部分對PCOS患者植入窗期子宮內(nèi)膜容受性進行探討。第一部分為：核仁管狀系統(tǒng)在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的

4、表達與分析：第二部分：GPR30、ERα、ERβ和PR在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析。
　　 第一部分核仁管狀系統(tǒng)在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析
　　 目的:
　　 透射電子顯微鏡下觀察有自主排卵的PCOS患者植入窗期子宮內(nèi)膜NCS的超微結(jié)構(gòu)、表達和分布情況，分析其影響因素。
　　 方法:
　　 采用病例-對照研究的方法，選取15名典型PCOS患者為病例組，15

5、名因男性因素或輸卵管因素就診的婦女為對照組。應(yīng)用陰道B超于月經(jīng)第8～10d開始動態(tài)監(jiān)測卵泡發(fā)育，于排卵后第7d（黃體中期，植入窗期）行子宮內(nèi)膜活檢。HE染色后觀察子宮內(nèi)膜的一般組織學(xué)形態(tài)；透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope，TEM）下觀察子宮內(nèi)膜上皮細胞內(nèi)NCS的形態(tài)和表達分布情況；陰道超聲監(jiān)測排卵當(dāng)日的子宮內(nèi)膜分型和厚度；化學(xué)免疫發(fā)光法檢測內(nèi)膜活檢當(dāng)天的血清孕酮（Progesterone，

6、P）濃度。探討NCS表達情況與孕激素、子宮內(nèi)膜厚度和分型之間的關(guān)系，分析PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性的形態(tài)學(xué)和超聲學(xué)指標(biāo)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1病例組和對照組一般情況比較
　　 病例組15例和對照組15例婦女，兩組間年齡（29.93±2.99vs30.47±3.66）和體重指數(shù)（body mass index，BMI），（23.33±1.49 vs22.99±0.93）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P>0.05）；

7、病例組LH/FSH（Luteinizing hormone/Follicle stimulating hormone，促黃體生成素/促卵泡生成素）（2.56±0.77 vs0.78±0.23）和雄激素（Testrone，T）（96.28±40.10vs51.26±12.44）比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（前者.P<0.01，后者P<0.05），符合PCOS患者的臨床和實驗室特征。
　　 2子宮內(nèi)膜組織的光鏡檢查結(jié)果
　　 常規(guī)

8、HE染色，光鏡下觀察：對照組子宮內(nèi)膜腺體豐富、粗大、彎曲，腺上皮成單層高柱狀，排列有序，腺腔變寬，胞質(zhì)豐富，細胞核位于細胞基部，核卵圓形，有核上空泡，核上區(qū)胞質(zhì)染成粉紅色。腺腔內(nèi)充滿了嗜酸性的糖原顆粒。間質(zhì)疏松，血管豐富。對照組15例子宮內(nèi)膜組織學(xué)分期，有11例（73.33％）處于分泌中期，分泌早期3例和增殖期1例（后兩者共26.67％）。病例組與對照組相比，腺體小，腺腔狹窄，腺腔中無或少量均質(zhì)狀嗜酸性分泌物。病例組15例中，分泌中期5

9、例（占33.33％），分泌早期7例和增生期3例（后兩者共占66.67％），較對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3子宮內(nèi)膜組織的透射電子顯微鏡檢查結(jié)果
　　 TEM下觀察對照組子宮內(nèi)膜腺上皮細胞，其游離面微絨毛較增生期長且常有分枝現(xiàn)象，微絨毛頂端胞質(zhì)突起——胞飲突（pinopode，PP）普遍存在，細胞核呈卵圓形或長形，一般位于細胞底部，核內(nèi)核仁管狀系統(tǒng)較多見，形態(tài)典型，且常見于胞飲突豐富表達的腺上皮細胞核內(nèi)

10、。NCS可位于核仁旁、核仁內(nèi)、核膜內(nèi)側(cè)或游離于常染色質(zhì)中，或頂著核膜突向胞質(zhì)，不同切面上可呈各種形狀，如球狀，螺旋狀，戒指狀，平等弧形管狀或整齊網(wǎng)格狀等，在合適的切面上可見NCS的小管腔與核周池相連續(xù)。胞質(zhì)中，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)育良好，豐富的游離核糖體均勻分布，巨大線粒體較多見，大量糖原沉積于頂部或底部。病例組中，7例樣本的子宮內(nèi)膜腺上皮細胞核內(nèi)未發(fā)現(xiàn)NCS，其余8例樣本中偶見或可見少量腺上皮細胞核內(nèi)出現(xiàn)NCS；對照組15例樣本中，腺上皮細胞

11、核內(nèi)NCS的出現(xiàn)率較高，形態(tài)較為典型，均可觀察到多個NCS出現(xiàn)。觀察還發(fā)現(xiàn)，多數(shù)核內(nèi)出現(xiàn)NCS細胞的游離面表達豐富的胞飲突。因樣本例數(shù)少，實驗條件所限，故未行統(tǒng)計學(xué)處理，有待進一步研究以明確其意義。
　　 4排卵日子宮內(nèi)膜厚度及分型測定的結(jié)果
　　 對照組排卵日的子宮內(nèi)膜厚度為（9.30±1.47）mm，病例組為（7.89±1.12）mm，兩組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；正常對照組排卵日的B超下子宮內(nèi)膜分型為A

12、型10例，B型4例，C型1例；病例組為A型5例，B型7例，C型3例；兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 5植入窗期血清孕激素測定的結(jié)果
　　 病例組植入窗期血清孕激素水平明顯低于對照組（10.81±5.09 vs16.73±2.59）ng/ml，兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 小結(jié):
　　 1 PCOS患者分泌中期子宮內(nèi)膜腺上皮NCS的出現(xiàn)率低，可能與子宮內(nèi)膜容受性下降有關(guān)

13、。
　　 2血清孕激素水平降低可能是導(dǎo)致PCOS患者子宮內(nèi)膜腺上皮NCS表達降低的重要原因之一。
　　 3 PCOS組的B超下子宮內(nèi)膜分型欠佳，可能與NCS表達降低有關(guān)，可能因此導(dǎo)致子宮內(nèi)膜容受性下降和受孕率降低。
　　 第二部分 GPR30、ERα、ERβ和PR在多囊卵巢綜合征患者植入窗期子宮內(nèi)膜的表達與分析
　　 目的:
　　 探討包括新型雌激素受體GPR30在內(nèi)的雌孕激素受體在兩組植入窗期子

14、宮內(nèi)膜的表達情況，分析雌孕激素受體表達之間的聯(lián)系。
　　 方法:
　　 子宮內(nèi)膜的獲取方法同第一部分。應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測新型雌激素受體GPR30、雌激素受體α（estradiol receptora，ERα）、雌激素受體β（estradiol receptorβ，ERβ）和孕激素受體（progesterone receptor，PR）在窗入期子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)的表達情況，應(yīng)用Motic Med6.0醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進

15、行數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1新型雌激素受體GPR30在子宮內(nèi)膜中的表達
　　 新型雌激素受體GPR30在子宮內(nèi)膜上皮細胞的細胞核和細胞質(zhì)中呈陽性表達，可見棕褐色顆粒呈均質(zhì)狀分布，其中胞質(zhì)中表達量明顯多于胞核，病例組中GPR30表達量顯著低于對照組，兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 2 ERα、ERβ在子宮內(nèi)膜中的表達
　　 ERα和ERβ主要表達于子宮內(nèi)膜上皮細胞核中，可見

16、棕褐色顆粒呈均質(zhì)狀分布，細胞質(zhì)中也有少量ERα和ERβ表達。病例組中兩者表達量顯著低于對照組，兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3 PR在子宮內(nèi)膜中的表達
　　 PR主要表達于子宮內(nèi)膜上皮細胞的細胞核中，可見棕褐色顆粒呈均質(zhì)狀分布，細胞質(zhì)中也有少量PR表達，病例組中PR表達量顯著高于對照組，兩組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 小結(jié):
　　 1 GPR30在子宮內(nèi)膜腺上皮細胞核

17、和細胞質(zhì)中陽性表達，其中胞質(zhì)中表達量明顯多于胞核。GPR30可能在胚胎著床期內(nèi)胚胎與內(nèi)膜之間的快速信息傳導(dǎo)過程中發(fā)揮作用。
　　 2 ERα和ERβ主要表達于子宮內(nèi)膜上皮細胞核中，兩者在PCOS患者植入窗期子宮內(nèi)膜中的表達降低，提示子宮內(nèi)膜對雌激素的應(yīng)答能力下降，是子宮內(nèi)膜對胚胎的容受性下降的原因之一。
　　 3 PR主要表達于子宮內(nèi)膜上皮細胞核中，PCOS患者子宮內(nèi)膜中PR表達明顯高于正常，孕激素對內(nèi)膜的調(diào)節(jié)功能下降，