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1、疫苗接種是預(yù)防流感最有效的方法,目前投入使用的流感疫苗可分為滅活苗和減毒活苗兩大類:滅活苗通過(guò)肌肉注射途徑免疫,能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)血凝素的中和抗體,但無(wú)法刺激鼻腔黏膜產(chǎn)生分泌型抗體,也無(wú)法誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答;減毒活苗(冷適應(yīng)減毒活苗)通過(guò)鼻吸入的方式免疫,其免疫的方式更接近自然感染的過(guò)程,可充分誘導(dǎo)體液免疫及細(xì)胞免疫應(yīng)答。減毒活苗無(wú)論從免疫途徑還是免疫效果上都優(yōu)于傳統(tǒng)滅活苗。自反向遺傳操作技術(shù)建立以來(lái),研究者們嘗試過(guò)多種方法開發(fā)減毒
2、活苗,降低流感病毒毒力,提高其免疫原性,研究出安全有效的減毒活苗已成為新型流感疫苗的發(fā)展方向。 在本研究中,我們根據(jù)A型流感病毒密碼子使用偏嗜性的統(tǒng)計(jì)規(guī)律,在保留NS片段包裝信號(hào)和不影響NS1/NS2剪切位點(diǎn)的前提下,選取稀有密碼子對(duì)A/PuertoRico/8/34(H1N1)病毒NS1基因內(nèi)部110個(gè)氨基酸區(qū)域進(jìn)行密碼子同義突變改造,將其替換為病毒使用頻率最低的密碼子,全基因合成NS基因,利用12質(zhì)粒反向遺傳操作技術(shù)拯救出含
3、有密碼子去優(yōu)化NS1基因的重組病毒(deoptimizedNS,deoNS)。MDCK細(xì)胞噬斑形成實(shí)驗(yàn)表明,病毒在細(xì)胞上的成斑能力大大減弱;病毒在MDCK細(xì)胞上的生長(zhǎng)曲線表明,其在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制能力比野生型病毒低約1000倍。BALB/c小鼠體內(nèi)致病力實(shí)驗(yàn)證明,deoNS病毒不能引起小鼠發(fā)病和死亡,感染第3天病毒在小鼠肺內(nèi)的復(fù)制滴度比野生型病毒低100倍,感染第5天其在小鼠肺內(nèi)的滴度比野生型病毒低1000倍。 本研究初步探索了通過(guò)
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