冬蟲夏草菌粉對5-6腎大部切除大鼠腎臟功能保護作用及其機制探討.pdf

1、目的：慢性腎臟?。╟hronic kidney disease，CKD）是嚴(yán)重危害人類健康的常見病，是導(dǎo)致終末期腎衰形成的關(guān)鍵原因，如何防治CKD進展已成為臨床重大課題。冬蟲夏草(Cordyceps sinensis，CS)是我國傳統(tǒng)名貴中藥，含有甘露醇、核苷、麥角固醇、多糖、微量元素等多種有效成分，應(yīng)用于腎臟疾病的治療已有上千年的歷史，但其確切作用機制仍不甚清楚。近年來研究表明，氧化應(yīng)激參與了腎臟病的發(fā)生、發(fā)展過程，是影響CKD預(yù)后的

2、重要危險因素。本研究利用大鼠5/6腎大部切除模型，觀察冬蟲夏草菌粉對腎臟的保護作用，并著重探討其對氧化應(yīng)激及線粒體功能的影響，及其可能的腎臟保護作用機制。
　　方法：SPF級8周齡SD雄性大鼠34只，體重200-220g。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機分為假手術(shù)（SHAM）組，n=10;5/6腎大部切除(SNX)組，n=12;5/6腎大部切除+蟲草干預(yù)(CS)組，n=12。建模次日起CS組予人工蟲草菌粉生理鹽水溶液2g/kg·bw·d灌胃，

3、余兩組予等體積生理鹽水。分別于建模術(shù)前、術(shù)后2周、4周、8周、10周、12周監(jiān)測大鼠體重、血壓變化，并收集24小時尿液檢測24h尿總蛋白、NAG。12周時心臟取血檢測血清肌酐(SCr)、尿素氮（BUN），留取腎臟組織分別行一般病理檢查觀察病變情況，電鏡觀察腎小管上皮細(xì)胞線粒體數(shù)量及形態(tài)改變;新鮮腎組織勻漿后檢測氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)(GSH-Px、SOD、MDA)，提取線粒體檢測膜電位及ROS改變;Western Blot檢測線粒體內(nèi)Cyto

4、-C、Prohibitin及胞漿Cyto-C、Prohibitin、Caspase-3、Caspase-9表達(dá)程度。檢測蟲草對腎臟組織炎癥因子如IL-1β、IL-6、MCP-1以及TNF-α表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：①12周時，與SHAM組相比，SNX組與CS組大鼠體重顯著降低(P＜0.01)，血壓顯著升高(P＜0.01)，但CS組較SNX組體重顯著升高(P＜0.01)，血壓值顯著下降(P＜0.01)。②CS組24h尿蛋白定量、NA

5、G水平分別于第6周、第4周開始與SNX組相比顯著降低(P＜0.05)。SNX組與CS組兩者第12周SCr及BUN水平較SHAM組顯著升高(P＜0.01)，但兩組比較，CS組較SNX組顯著下降。③通過PAS、MASSON染色觀察腎臟病理學(xué)改變發(fā)現(xiàn)，與SHAM組比較，SNX組與CS組出現(xiàn)不同程度的腎小球硬化、小管間質(zhì)纖維組織增生及炎癥細(xì)胞浸潤。與SNX組相比，CS組小球硬化指數(shù)、小管間質(zhì)纖維化程度及炎癥細(xì)胞浸潤程度明顯下降(P＜0.01)。

6、④電鏡結(jié)果顯示:與SHAM組比，SNX及CS組小管上皮細(xì)胞中線粒體數(shù)量減少，形態(tài)發(fā)生改變，CS組較SNX組有所改善(P＜0.01)。⑤與SHAM組比，SNX組Mn-SOD、GSH-Px、JC-1水平明顯降低(P＜0.01)，CS組較SNX組以上指標(biāo)均顯著升高(P＜0.01)，MDA、ROS則呈現(xiàn)相反趨勢(P＜0.01)。⑥Western Blot結(jié)果示:SNX組線粒體Cyto-C、Prohibitin表達(dá)水平與SHAM組顯著降低(P＜0

7、.05)，而胞漿中兩者表達(dá)顯著升高，CS組能夠有效改善這一表達(dá)倒置現(xiàn)象(P＜0.01)。同時胞漿中Caspase-3、Caspase-9表達(dá)情況SNX組及CS組均較SHAM組顯著升高(P＜0.01)，CS組較SNX組顯著降低(P＜0.01)。同時CS干預(yù)可降低促炎癥細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、MCP-1以及TNF-α的表達(dá)(P＜0.01)。
　　結(jié)論：人工蟲草菌粉能夠顯著改善的腎臟功能，同時對腎臟組織細(xì)胞線粒體形態(tài)功能具有顯著保