臍帶間充質干細胞植入腦缺氧缺血模型實驗研究.pdf

1、目的:
　　 觀察臍帶間充質干細胞(UCMSCs)植入腦缺氧缺血模型大鼠后，存活、增殖及分化情況。
　　 方法:
　　 取人臍帶組織，經(jīng)膠原酶和胰蛋白酶消化后，分離得到UCMSCs，5-溴,2-脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標記。將孕鼠隨機分為實驗組(n=6)和正常對照組(n=1)；實驗組結扎孕鼠子宮動脈15分鐘，建立宮內(nèi)全腦缺氧缺血損傷模型，自然生產(chǎn)；記錄胎鼠和活產(chǎn)仔鼠數(shù)目；測量仔鼠生后0、10、20d 體重；實驗

2、組仔鼠20 天日齡(P20)隨機分為干細胞組(n=24)和空白對照組(n=19)，分別經(jīng)小腦延髓池注射UCMSCs及干細胞培養(yǎng)液。于移植后1、2、3、4周，采用免疫組化方法，用鼠抗人抗體檢測BrdU、巢蛋白(Nestin)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、膠原纖維酸性蛋白(GFAP)；用硫堇染色觀察海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)；正常對照組自然分娩，其仔鼠同期對照。
　　 結果:
　　 實驗組大鼠死亡率46.3[％]；各組仔鼠出生(0

3、d)體重無差異(P＞0.05)，10、20d時實驗組較正常對照組體重低，有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。干細胞組于移植后1周海馬齒狀回即出現(xiàn)BrdU、Nestin、NSE和GFAP 陽性細胞；BrdU和Nestin 陽性細胞移植后第1-3周逐漸增高，組間兩兩比較具有統(tǒng)計學差異(P<0.01)，而第3、4周陽性細胞數(shù)目無明顯差異(P＞0.05)；NSE和GFAP 陽性細胞1-4周均逐漸增加，組間兩兩比較具有統(tǒng)計學差異(P<0.01)；硫堇染