CD14基因多態(tài)性與牛結(jié)核病的易感相關(guān)性研究.pdf

1、結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的人、畜、禽共患的一種以慢性經(jīng)過為主的傳染病。近些年，由于結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)和廣泛傳播，我國和其他一些國家的牛結(jié)核發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢，給養(yǎng)牛業(yè)以及人類健康帶來巨大威脅。本試驗(yàn)首次通過分析黃牛CD14基因序列，研究其多態(tài)性與牛結(jié)核的易感相關(guān)性，以期找到黃牛 CD14基因的結(jié)核病高風(fēng)險 SNP位點(diǎn)及其高風(fēng)險基因型，為牛結(jié)核病的防制和黃牛的遺傳育種提供新思路。研究內(nèi)容和結(jié)果主要包括：
　　1．牛結(jié)核病不

2、同診斷方法效果評價
　　檢測黃牛樣本共計(jì)459份。PPD檢測來自于洛陽市、宜陽縣、蘭考縣以及南陽市共四個縣市的黃牛，共計(jì)382頭。IFN-γ-ELISA檢測血樣共233份，其中有156份來自于PPD檢測牛，其余77份來自于洛陽周邊各屠宰場。結(jié)果顯示：PPD檢測出9份陽性，2份可疑，陽性率2.36％，IFN-γ-ELISA檢測出3份陽性，陽性率為1.29%，IFN-γ-ELISA的敏感性和準(zhǔn)確率都比PPD高；雙重檢測比單一方法的檢測

3、準(zhǔn)確率更高，有利于牛結(jié)核病的診斷。
　　2．黃牛CD14基因生物信息學(xué)分析
　　根據(jù)GenBank發(fā)表的荷斯坦奶牛CD14基因的序列設(shè)計(jì)引物，通過 PCR方法對黃牛的CD14基因進(jìn)行分段擴(kuò)增并測序，拼接后得到包含CD14完整編碼區(qū)以及5’端和3’端非編碼區(qū)的2969 bp的全序列。結(jié)果表明：黃牛CD14基因開放閱讀框全長966 bp，共編碼321個氨基酸；黃牛CD14基因與荷斯坦奶牛、水牛、綿羊、山羊、豬、獼猴、大猩猩、人、

4、小鼠的同源性依次降低，分別為99.8%、98.2%、96.8%、92.8%、83.5%、79.8%、79.7%、79.5%、71.9%；進(jìn)化樹所得的聚類結(jié)果與傳統(tǒng)的分類結(jié)果一致；通過蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測，發(fā)現(xiàn) CD14沒有跨膜結(jié)構(gòu)域。
　　3．黃牛CD14基因的SNP位點(diǎn)篩選與牛結(jié)核易感性相關(guān)分析
　　血樣分為結(jié)核病牛組(26份)和正常對照組(60份)。根據(jù)測序峰圖，讀取檢測結(jié)果，尋找雜合性位點(diǎn)，共發(fā)現(xiàn) C-251T、A-181G

5、、A270G、A336G、A367G、T729G、A777G、A1060G、T1080G共計(jì)9處多態(tài)性位點(diǎn)(MAF＞0.01)，運(yùn)用卡方檢驗(yàn)對測序得到的等位基因頻率在對照組中是否符合 Hardy-Weinberg遺傳平衡進(jìn)行檢測，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件分析9個 SNP位點(diǎn)。等位基因分析結(jié)果表明：C-251T等位基因 C、A-181G等位基因 A、A270G等位基因 A、G729T等位基因G、G1080T等位基因G的頻率在健康組與牛結(jié)核組間的

6、分布存在顯著差異(P＜0.05)，其余4個 SNP位點(diǎn)等位基因在健康組與牛結(jié)核組間的分布不存在顯著性差異(P＞0.05)。進(jìn)一步的基因型分析表明：C-251T、A336G、A367G、A777G和A1060G這5個SNP位點(diǎn)的不同基因型在健康組與牛結(jié)核組之間的分布差異性不顯著(P＞0.05)，A-181G、A270G、G729T和 G1080T基因多態(tài)性位點(diǎn)均與牛結(jié)核病的易感性顯著相關(guān)(P＜0.05)，-181GG、270GG、729G