經(jīng)前期綜合征(重度,PMDD)肝氣逆證大鼠模型標(biāo)準(zhǔn)化及其評(píng)價(jià)方法的建立.pdf

1、目的:摸索PMDD肝氣逆證大鼠模型標(biāo)準(zhǔn)化造模方法;對(duì)制備模型進(jìn)行質(zhì)量考核,探索模型評(píng)價(jià)的量化考核問(wèn)題;以模型為載體考察病證及中藥白香丹膠囊對(duì)動(dòng)物體內(nèi)微觀指標(biāo)含量變化的影響,探討模型行為學(xué)表現(xiàn)下的中樞機(jī)制。方法:采用情志刺激為主多因素分段刺激法(Test II)制備PMDD肝氣逆證大鼠模型,同時(shí)與傳統(tǒng)的情志刺激為主多因素造模法(Test I)對(duì)比,并采用氟西汀、白香丹行藥物干預(yù)。通過(guò)比對(duì)各組大鼠在糖水偏好實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中

2、的關(guān)鍵行為學(xué)指標(biāo),實(shí)現(xiàn)PMDD肝氣逆證大鼠模型制備方法的標(biāo)準(zhǔn)化。對(duì)模型標(biāo)準(zhǔn)化后的大鼠行為學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行信度檢驗(yàn)、效度估計(jì),最終實(shí)現(xiàn)模型評(píng)價(jià)方法的初步量化考核。具體通過(guò)SPSS軟件計(jì)算模型評(píng)價(jià)方法的表面效度、結(jié)構(gòu)效度的因子分析參數(shù)、復(fù)測(cè)信度的組內(nèi)相關(guān)性系數(shù)、內(nèi)部一致性系數(shù)(Cronbach’s a系數(shù))進(jìn)行考核。收集標(biāo)準(zhǔn)造模方法制備的各組大鼠外周血清并分離其額葉、海馬、下丘腦三個(gè)腦區(qū),分別采用高效液相色譜法檢測(cè)模型大鼠中樞不同腦區(qū)及外周血中單

3、胺類物質(zhì)(NE、5-HT、DA)、放射免疫法測(cè)定性激素及其調(diào)節(jié)激素(P、 PRL、E2)的含量。結(jié)果:(1)關(guān)鍵行為學(xué)指標(biāo)評(píng)測(cè)中,Test I中造模后非接受期模型組、氟西汀組大鼠指標(biāo)LA較正常組顯著升高(P＜0.01、P＜0.01),白香丹組大鼠較模型組顯著下降(P＜0.05);白香丹組大鼠較模型組SC％顯著上升(P＜0.05)。Test II中造模后非接受期模型組大鼠指標(biāo)OT%、OE%、SC%較正常組顯著下降(P＜0.01、P＜0.0

4、5、P＜0.05),LA則顯著上升(P＜0.001)。給予白香丹和氟西汀干預(yù)后,大鼠OT%、OE%、OFT變化均可得到明顯糾正(P＜0.05)。(2)標(biāo)準(zhǔn)化造模后大鼠的模型評(píng)價(jià)方法信效度檢驗(yàn)結(jié)果顯示:模型組大鼠宏觀表征切合肝氣逆證患者的臨床表現(xiàn),提示表面效度良好。因子分析顯示:SPT-OFT-EPM評(píng)價(jià)方法可以抽提三個(gè)公因子:OT%、OE%對(duì)焦慮因子FⅠ貢獻(xiàn)度大(92.6%,88.6%):LA in OFT、LA in EPM對(duì)運(yùn)動(dòng)因子

5、FⅡ貢獻(xiàn)度大(85.2%,93.9%);HD、RE、SC%對(duì)探究行為因子FⅢ貢獻(xiàn)度大(54.1%,86.8%,55.2%)。ICC結(jié)果顯示:SC%(ICC=0.959,P＜0.01)、LA(ICC=0.991,P＜0.01)、OT%(ICC=0.791,P＜0.01)、OE%(ICC=0.923,P＜0.01)均具有較好的復(fù)測(cè)信度。Cronbach’sα系數(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示:焦慮維度Cronbach’sα=0.671,運(yùn)動(dòng)維度Cronbac

6、h’sα=0.254,探究行為維度Cronbach’sα=0.656,評(píng)價(jià)方法整體維度Cronbach’sα=0.576。(3)標(biāo)準(zhǔn)化造模后大鼠的微觀指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組大鼠NE含量在下丘腦、額葉中顯著升高(P＜0.05、P＜0.01)、外周血清中顯著降低(P＜0.05);DA含量在海馬、下丘腦、額葉中表現(xiàn)為顯著降低(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01)、血清中顯著升高(P＜0.01);5-HT在海馬、下丘腦、外

7、周血清中顯著降低(P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05)、額葉中顯著升高(P＜0.05)。同時(shí)血清中P與E2的含量顯著降低(P＜0.01、P＜0.01)。給藥干預(yù)后,與模型組大鼠相比,氟西汀組大鼠NE含量在額葉中顯著下降(P＜0.05)、在外周血清中顯著升高(P＜0.05);DA含量在額葉中顯著上升(P＜0.05)、在外周血清中顯著下降(P＜0.05);5-HT含量在額葉顯著下降(P＜0.01)、在外周血清中顯著上升(P＜0.05)

8、。同時(shí)血清中P與E2的含量顯著升高(P＜0.05、P＜0.01)。各組大鼠PRL含量無(wú)顯著差異。與正常組相比,白香丹組大鼠NE含量在額葉、下丘腦中顯著降低(P＜0.05、P＜0.05)、在外周血清中顯著升高(P＜0.05);5-HT含量在額葉顯著降低(P＜0.05)。結(jié)論:(1)PMDD肝氣逆證大鼠模型分段刺激造模法與連續(xù)刺激造模法相比:造模原理更契合發(fā)病機(jī)制,制備方法更科學(xué)合理,所制備的動(dòng)物模型行為學(xué)指標(biāo)更貼近臨床證候群。(2)采用S

9、PT-OFT-EPM的模型評(píng)價(jià)方法對(duì)PMDD肝氣逆證大鼠模型進(jìn)行評(píng)價(jià),可以評(píng)測(cè)模型中焦慮、運(yùn)動(dòng)、探索行為因子的細(xì)微變化。該評(píng)價(jià)方法具有較高的表觀信度與內(nèi)部一致性,顯示出評(píng)價(jià)方法與模型本身契合緊密。模型制備方法的復(fù)測(cè)信度良好,提示采用分段刺激造模法制備的PMDD肝氣逆證大鼠模型具有高度的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。(3)PMDD肝氣逆大鼠證狀呈現(xiàn)與下丘腦、額葉NE含量升高,海馬、下丘腦、額葉中DA含量下降,海馬、下丘腦、外周血清中5-HT含量降低有