MCF-7荷瘤小鼠不同樹突狀細(xì)胞亞群凋亡的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2009級(jí)博士學(xué)位論文MCF7荷瘤小鼠不同樹突狀細(xì)胞亞群凋亡的研究ApoptosisofDendriticCellSubsetsinMCF7Tumor—bearingMice課題來源：自選專業(yè)名稱學(xué)位申請人指導(dǎo)教師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員腫瘤學(xué)張還珠羅榮城教授陳尊器教授陳運(yùn)賢教授周杰教授張為民教授郭亞兵教授劉魁鳳教授袁亞維教授論文評(píng)閱人陳運(yùn)賢教授周杰教授郭亞兵教授2012年5月3日廣州摘要的免疫治療方法和新的疫苗的提供基

2、礎(chǔ)信息。方法1取對(duì)數(shù)生長期MCF7細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度為1x107／ml，用于以下實(shí)驗(yàn)。220只5周齡無特定病原體(SPF)級(jí)BALB／C雌性裸鼠，隨機(jī)分為2組，用lml注射器向荷瘤組小鼠右側(cè)胸壁第二對(duì)乳腺脂肪墊注入02mL上述MCF7細(xì)胞懸液，對(duì)照組注入02mL無血清培養(yǎng)基。待腫塊直徑達(dá)5mm后處死小鼠。3取小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞，RPMll640(10％FBS)培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為107／15ml，每llll(60mm))hn入15ml細(xì)胞

3、懸液，再加入15mlRPMll640隔3天更換1次培養(yǎng)液。第3天吸棄全部培養(yǎng)基及懸浮細(xì)胞，加入含100ng／mlrmGMCSF100ng／mlrmlL4的上述培養(yǎng)基共孵育，第7天更換培養(yǎng)基時(shí)補(bǔ)加脂多糖100ng／mL共孵育，第8天吹打疏松貼壁的增殖性細(xì)胞聚集體，次日收集懸浮的細(xì)胞即為富集的DCs。相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)。收集細(xì)胞做以下實(shí)驗(yàn)。4用PBS(含I％FBS)調(diào)整細(xì)胞濃度為106／100d，每流式管加入100ul細(xì)胞懸液，再

4、加入lug／管相應(yīng)熒光素偶聯(lián)一抗，上機(jī)檢測。5荷瘤小鼠乳房腫塊病理免疫組化檢測：supervision二步法檢測ER、PR、CerbB2、Ki67。6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)描述用均數(shù)4標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組均數(shù)比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)u=005。結(jié)果1對(duì)數(shù)生長期MCF7細(xì)胞倒置顯微鏡下觀察，貼壁生長，形態(tài)良好、折光性強(qiáng)。2荷瘤組小鼠在注射MCF7后第16天乳腺腫塊達(dá)5mm或以上。荷瘤組和對(duì)照組小鼠體重在荷瘤前及荷瘤后均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具