小檗胺對兔急性高眼壓視網(wǎng)膜損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討小檗胺(Berbamine,BER)對急性高眼壓下視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞(retinal neurons,RN)損傷的保護作用及其保護機制。
　　方法：將96只新西蘭大耳白兔隨機分成6組：正常對照組，陰性對照組、陽性對照組，BER A、B、C組。正常對照組不做任何處理，陰性對照組造模前1h、術(shù)后1次/日用生理鹽水10mL灌胃，陽性對照組造模前1h、術(shù)后1次/日將維拉帕米（Verapamil，VER）用生理鹽水制備成10mL混懸液

2、灌胃，劑量為20mg/kg，BER A、B、C組造模前1h、術(shù)后1次/日將BER用生理鹽水制備成10mL混懸液灌胃，劑量依次為80mg/kg、100mg/kg、120mg/kg。除正常對照組以外，各組均行右眼前房穿刺灌注生理鹽水并用血壓計加壓的方法制作兔缺血-再灌注損傷動物模型。術(shù)后即刻、24h、72h、168h四個時相處死大白兔，每個時相每組4只。按不同時段用Schiǒtz眼壓計定期測量眼壓，用火焰原子吸收分光光度法測量不同時段視網(wǎng)膜

3、組織Ca2+的變化，HE染色觀察視網(wǎng)膜厚度的變化，AgNOR染色檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(retinal ganglion cells,RGCs)的活性。
　　結(jié)果：
　　1．用前房穿刺灌注生理鹽水聯(lián)合血壓計加壓可使兔眼壓升高并維持在110mmHg左右。
　　2．兔視網(wǎng)膜細胞內(nèi)Ca2+含量在視網(wǎng)膜缺血-再灌注損傷中再灌注即刻己經(jīng)有升高，各組與正常對照組比較，差異有顯著性（P<0.05），陰性組隨再灌注時間延長而繼續(xù)增高，到

4、術(shù)后168h仍維持較高水平。而BER對細胞總鈣的影響隨劑量增加而增強，細胞內(nèi)Ca2+含量減少明顯，至術(shù)后168h，細胞總Ca2+含量逐漸降至正常，BERC組與正常對照組相比較，差異無顯著性(P>0.05)，另外VER組在各時相對Ca2+內(nèi)流有強烈的抑制作用，且高濃度的BER組作用效果跟VER組相比，差異無顯著性(P>0.05)。
　　3．陰性對照組組織學(xué)變化早期為視網(wǎng)膜水腫(尤以視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層及內(nèi)網(wǎng)狀層為明顯)。晚期視網(wǎng)膜內(nèi)層萎

5、縮、變薄，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)目減少。陽性對照組及BER A、B、C組視網(wǎng)膜的組織結(jié)構(gòu)變化特點是：早期水腫較陰性對照組輕，晚期視網(wǎng)膜內(nèi)層的厚度明顯厚于陰性對照組，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的數(shù)目明顯多于陰性對照組。在術(shù)后168h，BER C組、陽性對照組視網(wǎng)膜大致恢復(fù)正常，神經(jīng)纖維層的厚度及RGCs數(shù)目與正常對照組相比，差異已不明顯（P>0.05）。
　　4．各試驗組RGCs細胞核內(nèi)銀染顆粒在術(shù)后即刻無明顯變化，陰性對照組的RGCs細胞核內(nèi)銀

6、染顆粒數(shù)在術(shù)后24h明顯減少，并隨時間延長，RGCs細胞核內(nèi)銀染顆粒數(shù)逐漸減少。陽性對照組及BER A、B、C組RGCs細胞核內(nèi)銀染顆粒數(shù)雖均小于正常對照組（P<0.05），但均高于陰性對照組（P<0.05），即差異有顯著性。在術(shù)后168h BER C組、陽性對照組RGCs活性大致恢復(fù)正常，RGCs細胞核內(nèi)銀染顆粒數(shù)與正常對照組相比，差異無顯著性（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．通過前房穿刺灌注生理鹽水并用血壓計加壓的

7、方法可獲得持續(xù)、穩(wěn)定且可控性的缺血-再灌注視網(wǎng)膜損傷動物模型；
　　2．視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞內(nèi)Ca2+超載，可能參與了視網(wǎng)膜缺血-再灌注損傷后RGCs的凋亡；
　　3．視網(wǎng)膜損傷的主要組織學(xué)變化為視網(wǎng)膜內(nèi)層的變薄及RGCs數(shù)目的減少；
　　4．BER可以明顯減輕視網(wǎng)膜內(nèi)層的變薄及RGCs數(shù)目的減少；并對RGCs活性有部分保護作用；
　　5．BER可能通過抑制視網(wǎng)膜細胞Ca2+的內(nèi)流從而保護兔視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞，并呈濃度依賴