細胞凋亡抑制蛋白2在胰腺癌中的表達及其與胰腺癌吉西他濱化療的關系.pdf

1、目的: 本研究觀察細胞凋亡抑制蛋白2(cell inhibitor of apoptosis protein2，C-IAP2)在胰腺癌組織以及胰腺癌細胞中的表達情況并分析其與病理分級、臨床分期之間的關系，并進一步闡明C-IAP2的表達與吉西他濱化療促胰腺癌凋亡作用和胰腺癌吉西他濱化療耐藥的關系。 方法: 1.收集本院普通外科2005年8月至2008年3月手術切除的胰腺癌組織標本32例，癌旁正常胰腺組織標本18例，

2、運用免疫組織化學染色方法觀察C-IAP2在胰腺癌組織以及癌旁正常胰腺組織的表達情況，分析C-IAP2的表達水平與胰腺癌組織的病理分級和臨床分期之間的關系。Westem blot進一步觀察C-IAP2在低分化的胰腺癌PANC-1細胞、中分化的胰腺癌AsPC-1細胞、高分化的胰腺癌BxPC-3細胞中的表達情況，分析C-IAP2的表達水平與胰腺癌細胞的病理分級之間的關系。 2.研究吉西他濱體外誘導人胰腺癌PANC-1細胞凋亡作用和分子

3、機理，MTT比色法測定細胞增殖活性，透射電子顯微鏡觀察凋亡細胞形態(tài)，AnnexinV-PI雙標記法流式細胞術檢測細胞凋亡率，RT-PCR分析細胞C-IAP2的mRNA表達，Westem blot法檢測不同濃度吉西他濱作用后C-IAP2、第二線粒體來源的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活劑(second mitochondria-derived activator ofcaspase，Smac)、Bcl(B cell Iymphoma)-2和

4、Bax的表達變化，分光光度法檢測Caspase-3、Caspase-9活性。 3.采用間歇濃度梯度遞增法誘導胰腺癌PANC-1細胞株對吉西他濱耐藥，檢測其生物學性狀變化，免疫熒光和免疫印跡法對比觀察C-IAP2活性變化。 結果: 1.C-IAP2在胰腺癌組織均有表達(32/32，100％)、癌旁正常胰腺組織(8/18，44.4％)中有表達，胰腺癌組織中表達水平顯著強于癌旁正常胰腺組織。C-IAP2的表達強度在不同

5、分化程度的腫瘤組織中的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C-IAP2在低分化的胰腺癌細胞PANC-1中呈高表達，而在中分化和高分化的胰腺癌細胞AsPC-1和BxPc-3中表達較低(P<0.05)。 2.MTT比色法測定顯示：吉西他濱抑制人胰腺癌細胞株PANC-1增殖，呈濃度依賴性：其IC50值為5.79ug/ml。AnnexinV-PI雙標記法FCM分析、透射電子顯微鏡觀察的結果證實：吉西他濱具有誘導人胰腺癌PANC-1細胞株凋

6、亡作用。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)吉西他濱能顯著下調PANC-1細胞C-IAP2的mRNA表達，Westem blot分析發(fā)現(xiàn)吉西他濱能顯著下調胰腺癌細胞PANC-1的C-IAP2、Bcl-2蛋白表達水平，上調Smac、Bax蛋白表達水平，分光光度法分析發(fā)現(xiàn)吉西他濱作用后胰腺癌PANC-1細胞的Caspase-3、Caspase-9活性顯著升高。 3.藥物培養(yǎng)3個月后，得到穩(wěn)定傳代的PANC-1/Gem耐藥細胞株，其形態(tài)學、生長特征等

7、均發(fā)生了明顯變化，細胞變圓、體積縮小、顆粒樣物質增多及細胞倍增時間延長，對吉西他濱、5-氟尿嘧啶、阿霉素和絲裂霉素的耐藥性均顯著增加；耐藥細胞PANC-1/Gem的C-IAP2的蛋白表達水平也明顯增高。 結論: 1.C-IAP2在胰腺癌組織中的表達水平以及陽性率均顯著高于癌旁的正常胰腺組織，推測C-IAP2的表達升高可能在胰腺癌的發(fā)生中起一定作用。C-IAP2的表達強度在不同分化程度的腫瘤組織和細胞中的差異有統(tǒng)計學意義，