苓桂養(yǎng)心湯對(duì)擴(kuò)張型心肌病大鼠心肌保護(hù)作用及肌漿網(wǎng)鈣調(diào)控蛋白的影響.pdf

1、目的:明確苓桂養(yǎng)心湯對(duì)擴(kuò)張型心肌病(dilated cardiomyopathy，DCM)大鼠心功能、心肌的保護(hù)作用;觀察苓桂養(yǎng)心湯對(duì)DCM大鼠心肌肌漿網(wǎng)(SR)鈣調(diào)控相關(guān)蛋白的影響，探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法:SD大鼠經(jīng)腹腔注射阿霉素2.5mg/kg/次，每周1次，連續(xù)6周，共6次，總量15mg/kg，第8周建成阿霉素誘導(dǎo)的擴(kuò)張型心肌病大鼠模型。將35只DCM大鼠隨機(jī)分為模型組(n=15)，培哚普利組(n=10)，苓桂養(yǎng)心

2、湯組(n=10)，另設(shè)正常組(n=10)。培哚普利組大鼠以培哚普利3 mg/kg/d灌胃，苓桂養(yǎng)心湯組大鼠用苓桂養(yǎng)心湯顆粒劑1.72g/kg/d灌胃，其余兩組以蒸餾水灌胃，共灌胃給藥8周。第17周行心臟超聲檢測(cè)左室收縮末徑(LVESD)、左室舒張末徑(LVEDD)、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、縮短率(FS);取靜脈血，用于大鼠血清B型尿鈉肽(BNP)、肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平測(cè)定;取大鼠左心室心肌進(jìn)行HE染色和透射電子顯微鏡檢測(cè)大鼠心肌

3、病理學(xué)形態(tài);采用RT-PCR和Western blot法分別測(cè)定大鼠心肌肌漿網(wǎng)鈣泵(SERCA2a)、鈣釋放通道(RyR2)、受磷蛋白(PLB)、肌集鈣蛋白(Calsequestrin)、L-型鈣離子通道(CAV1.3)的mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1心臟超聲指標(biāo):與正常組[LVEDd(6.53±0.37mm)、LVESd(4.06±0.32mm)、LVEF(69.60±4.95)％、FS(37.78±3.54)％]比較，

4、模型組[LVEDd(7.19±0.20mm)、LVESd(5.66±0.48mm)、LVEF(46.12±8.12)％、FS(21.26±1.98)％]大鼠左室內(nèi)徑明顯增大，LVEF和FS明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);與模型組比較，苓桂養(yǎng)心湯組[LVEDd(6.95±0.20)、LVESd(4.85±0.39mm)、LVEF(57.96±6.36)％、FS(30.16±1.68)％]大鼠左室內(nèi)徑明顯減小，LVEF和FS明顯

5、升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);培哚普利組[LVEDd(6.96±0.24mm)、LVESd(5.06±0.38mm)、LVEF(54.39±5.18)％、FS(27.32±3.65)％]大鼠左室內(nèi)徑明顯減小，LVEF和FS明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);苓桂養(yǎng)心湯組與培哚普利組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。2血清BNP(pg/ml):與正常組(50.34±3.94)比較，模型組(62.86±5.77)大鼠血

6、清BNP明顯升高(p＜0.01);與模型組比較，苓桂養(yǎng)心湯組(56.20±4.54)大鼠血清BNP水平顯著降低（p=0.01），培哚普利組(56.84±5.25)大鼠血清BNP水平顯著降低(p＜0.05);苓桂養(yǎng)心湯組與培哚普利組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。3血清cTnⅠ(ng/ml):與正常組(0.79±0.02)比較，模型組(0.92±0.08)大鼠血清cTnⅠ明顯升高(p＜0.01);與模型組比較，苓桂養(yǎng)心湯組(0.84

7、±0.07)大鼠血清cTnⅠ水平明顯降低(p＜0.05)，培哚普利組(0.81±0.09)大鼠血清cTnⅠ顯著降低(p＜0.01);苓桂養(yǎng)心湯組與培哚普利組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。4心肌HE染色:苓桂養(yǎng)心湯組大鼠心肌HE染色結(jié)果顯示大鼠心肌纖維排列紊亂較輕，心肌細(xì)胞肥大、空泡變性，血管充血和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)輕度纖維化程度較模型組有明顯改善。與培哚普利組無(wú)明顯差異。心肌透射電子顯微鏡結(jié)果:苓桂養(yǎng)心湯組大鼠心肌透射電子顯微鏡

8、顯示在心肌纖維連續(xù)性，線粒體形態(tài)及分布，內(nèi)膜嵴改變等方面較模型組改善，與培哚普利組無(wú)差異。5心肌肌漿網(wǎng)鈣調(diào)控相關(guān)蛋白基因表達(dá):PLBmRNA:與正常組大鼠(0.90±0.34)比較，模型組(1.28±0.34) PLBmRNA表達(dá)明顯升高(p＜0.05);與模型組比較，苓桂養(yǎng)心湯組(0.95±0.25)PLB mRNA表達(dá)明顯降低(p＜0.05)，培哚普利組(0.88±0.39)PLBmRNA表達(dá)明顯降低(p＜0.05)。SERCA2a

9、 mRNA:與正常組大鼠(1.09±0.25)比較，模型組(0.87±0.10)表達(dá)明顯降低(p＜0.05);與模型組比較，苓桂養(yǎng)心湯組(1.00±0.09)和培哚普利組(1.00±0.10) SERCA2a mRNA表達(dá)明顯升高(p＜0.05)。RyR2mRNA比較:與正常組大鼠(0.95±0.26)比較，苓桂養(yǎng)心湯組(0.66±0.11)、培哚普利組(0.50±0.30)、模型組(0.50±0.10)大鼠RyR2mRNA表達(dá)均下降(

10、p＜0.01);與模型組比較，苓桂養(yǎng)心湯組RyR2 mRNA表達(dá)均升高(p＜0.05)，培哚普利組RyR2mRNA表達(dá)無(wú)差異(p＞0.05)。CAV1.3mRNA:與正常組大鼠(1.55±0.56)比較，模型組(1.12±0.34)大鼠CAV1.3mRNA表達(dá)明顯降低(p＜0.05);與模型組比較，苓桂養(yǎng)心湯組(1.51±0.48)CAV1.3mRNA表達(dá)提高(p＜0.05)，培哚普利組(1.32±0.80) CAV1.3mRNA表達(dá)無(wú)

11、差異(p＞0.05)。Calsequestrin mRNA:與正常組大鼠(1.19±0.48)比較，模型組(0.79±0.26)大鼠CalsequestrinmRNA表達(dá)明顯降低(p＜0.05);與模型組比較，苓桂養(yǎng)心湯組(1.04±0.26) CalsequestrinmRNA表達(dá)提高(p＜0.05)，培哚普利組(0.84±0.22)CalsequestrinmRNA表達(dá)無(wú)差異(p＞0.05)。苓桂養(yǎng)心湯組與培哚普利組在所有的基因表達(dá)

12、比較中，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。6大鼠心肌肌漿網(wǎng)鈣調(diào)控相關(guān)蛋白蛋白表達(dá):SERCA2a:模型組(0.72±0.23)與正常組(1.16±0.21)、培哚普利組(0.97±0.15)、苓桂養(yǎng)心湯組(1.00±0.21)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。Calsequestrin:模型組(0.53±0.16)與正常組(0.78±0.11)、培哚普利組(0.71±0.15)、苓桂養(yǎng)心湯組(0.68±0.15)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

13、意義(p＜0.05)。PLB:模型組(0.66±0.09)與正常組(0.54±0.10)、培哚普利組(0.55±0.10)、苓桂養(yǎng)心湯組(0.57±0.09)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。在所有的蛋白表達(dá)中，苓桂養(yǎng)心湯組與正常組、培哚普利組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　結(jié)論:1.苓桂養(yǎng)心湯能縮小DCM大鼠左心室內(nèi)徑，提高左心室射血分?jǐn)?shù)和縮短率，降低血清BNP和cTnⅠ水平，保護(hù)DCM大鼠損傷心肌，改善心功