遠隔缺血后處理對大鼠窒息性心搏驟停腦損傷的作用研究.pdf

1、心搏驟停可使全身各組織器官發(fā)生缺血缺氧，及時有效的心肺復(fù)蘇可以使大多數(shù)患者恢復(fù)自主循環(huán)，但復(fù)蘇后的腦損傷卻給患者和家屬帶來了痛苦和沉重的負擔(dān)。尋找切實可行的腦復(fù)蘇措施，提高心肺復(fù)蘇后患者的生存質(zhì)量，是一個亟待解決的臨床醫(yī)學(xué)難題。雖然研究者們進行了許多積極的探索，但目前真正能從基礎(chǔ)轉(zhuǎn)化到臨床應(yīng)用的治療措施甚少。近幾年，人們發(fā)現(xiàn)遠隔缺血后處理能通過對非生命重要器官進行短暫的非致死性缺血來保護對缺氧缺血極其敏感的心、腦等生命重要器官。由于它能

2、在缺血事件發(fā)生后實施，對于心肺復(fù)蘇腦損傷的保護具有重要的臨床應(yīng)用價值。但目前的研究主要集中在局灶性腦缺血再灌注損傷以及四血管法所致的全腦缺血再灌注損傷，而遠隔缺血后處理對窒息性心搏驟停所致的全腦缺血再灌注損傷的保護作用尚未見報道。Janus kinase2/signal transducer and activator transcription3(JAK2/STAT3)是一種細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在細胞的增殖、分化和凋亡中發(fā)揮重要的作用

3、。有研究表明，該信號通路可能參與了腦缺血再灌注損傷，但其具體的作用機制目前尚不十分清楚。本研究采用窒息性心搏驟停（asphyxial cardiac arrest，ACA）所致的全腦缺血再灌注損傷模型，觀察各組大鼠自主循環(huán)恢復(fù)后不同時點的行為學(xué)改變、海馬組織病理情況、血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）濃度變化、空間學(xué)習(xí)記憶能力的變化以及相關(guān)蛋白表達情況，探討遠隔缺血后處理是否對其具有保護作

4、用，并進一步揭示JAK2/STAT3信號通路在窒息性心搏驟停所致的全腦缺血再灌注損傷中的作用，為臨床上心搏驟?；颊咛峁┮环N新的治療策略和思路。
　　第一部分遠隔缺血后處理對大鼠窒息性心搏驟停腦損傷的作用研究
　　目的：探討遠隔缺血后處理是否對大鼠窒息性心搏驟停腦損傷具有保護作用。
　　方法：建立8min窒息性心搏驟停腦損傷動物模型。雄性SD大鼠69只，隨機均分為三組：假手術(shù)組（Sham組）、模型組（Control組）及

5、遠隔缺血后處理組（RIPost組）。Sham組大鼠僅進行氣管插管，不進行8min窒息以及心肺復(fù)蘇；Control組大鼠行氣管插管、8min窒息及心肺復(fù)蘇；RIPost組大鼠在自主循環(huán)恢復(fù)后即刻行右下肢缺血后處理。計算三組大鼠的心肺復(fù)蘇成功率；自主循環(huán)恢復(fù)后24h、72h、7d對三組大鼠進行神經(jīng)功能缺損評分(neurological deficit score，NDS)；自主循環(huán)恢復(fù)后48h采用 ELISA法檢測三組大鼠外周血神經(jīng)元特異性

6、烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)含量；自主循環(huán)恢復(fù)后72h對三組大鼠腦組織進行Nissl染色，觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)變化及存活神經(jīng)元數(shù)量；自主循環(huán)恢復(fù)后7d采用Morris水迷宮對三組大鼠進行空間學(xué)習(xí)記憶能力檢測。
　　結(jié)果：遠隔缺血后處理改善了大鼠窒息性心搏驟停腦損傷的神經(jīng)功能缺損，降低了大鼠外周血NSE含量，增加了其海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的存活數(shù)量，增強了早期心搏驟停腦損傷大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能

7、力。
　　結(jié)論：遠隔缺血后處理對大鼠窒息性心搏驟停腦損傷具有保護作用。
　　第二部分 JAK2/STAT3通路在遠隔缺血后處理減輕大鼠窒息性心搏驟停腦損傷中的作用
　　目的：探討JAK2/STAT3信號通路是否參與了遠隔缺血后處理減輕大鼠窒息性心搏驟停腦損傷。
　　方法：建立8min窒息性心搏驟停腦損傷動物模型。雄性SD大鼠40只，隨機均分為四組：假手術(shù)組（Sham組）、模型組（Control組）、遠隔缺血后處理

8、組（RIPost組）以及AG490+遠隔缺血后處理組（AG490組）。Sham組大鼠僅進行氣管插管，不進行8min窒息以及心肺復(fù)蘇；Control組大鼠行氣管插管、8min窒息及心肺復(fù)蘇；RIPost組大鼠在自主循環(huán)恢復(fù)后即刻行右下肢缺血后處理；AG490組大鼠在自主循環(huán)恢復(fù)后即刻行右下肢缺血后處理，并經(jīng)靜脈注射JAK2特異性抑制劑AG490(1mg/kg)。計算各組大鼠的心肺復(fù)蘇成功率；自主循環(huán)恢復(fù)后24h采用Western Blot

9、法對四組大鼠海馬組織Bcl-2、Bax、p-STAT3蛋白的表達情況進行檢測；自主循環(huán)恢復(fù)后72h對四組大鼠腦組織進行Nissl染色，觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)變化及存活神經(jīng)元數(shù)量。
　　結(jié)果：遠隔缺血后處理可以減輕大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞損傷，增加存活神經(jīng)元數(shù)量；給予AG490后，大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞損傷加重，存活神經(jīng)元數(shù)量減少。遠隔缺血后處理可上調(diào)大鼠海馬組織Bcl-2、p-STAT3蛋白的表達，下調(diào)海馬組織Bax蛋白的表