銀杏酸的純化工藝及抗炎活性研究.pdf

1、本論文主要研究了銀杏酸提取液的純化工藝，選出較優(yōu)的純化方法。通過(guò)動(dòng)物炎癥模型研究銀杏酸的抗炎活性，并在分子水平上研究了銀杏酸對(duì)變應(yīng)性接觸性皮炎(Allergic contact dermatitis，ACD)抗炎作用機(jī)理。主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下:
　　1、銀杏酸純化方法的研究。通過(guò)水洗與硅膠層析結(jié)合的方法及NaOH萃取法對(duì)銀杏酸進(jìn)行純化，利用HPLC法進(jìn)行銀杏酸含量的檢測(cè)，得到水洗法結(jié)合硅膠層析法的最優(yōu)工藝:水洗法在料液比為1∶8

2、，溫度為60℃，水洗時(shí)間為5h，可將銀杏酸純度由33.9％提高到47.82％;硅膠層析法是將原濃度的銀杏酸以1mL/min的流速上樣，之后以1 mL/min的流速對(duì)其進(jìn)行洗脫，可將水洗處理后的銀杏酸純度升高至67.5％。NaOH溶液萃取法可將銀杏酸醇提液的純度由33.9％提高至62.3％。
　　2、銀杏酸抗炎作用的研究。采用二甲苯致小鼠耳腫脹法、角叉菜膠致小鼠足腫脹法、小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)、小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)銀杏

3、酸的皮膚外用抗炎作用。結(jié)果表明:銀杏酸能抑制二甲苯所致的耳腫脹及角叉菜膠所致的足趾腫脹，銀杏酸高、低劑量組小鼠耳腫脹率和足趾腫脹率明顯低于模型對(duì)照組。銀杏酸還能顯著抑制二甲苯所致的小鼠腹部皮膚毛細(xì)血管通透性增高。在小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎(ACD)實(shí)驗(yàn)中，銀杏酸皮膚外用組小鼠耳腫脹度和腫脹率降低，皮損情況得到改善，表明對(duì)小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎也有較好的治療效果。病理組織學(xué)觀察結(jié)果表明銀杏酸能降低二甲苯致耳腫脹的局部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、減輕皮損細(xì)胞水

4、腫，降低血管擴(kuò)張程度;銀杏酸能降低角叉菜膠所致足腫脹組織的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);降低ACD小鼠耳廓組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及細(xì)胞水腫。研究結(jié)果表明銀杏酸能抑制皮膚炎癥和變態(tài)反應(yīng)，具有明顯的抗皮炎作用。
　　3銀杏酸對(duì)變應(yīng)性接觸性皮炎(ACD)抗炎作用機(jī)理。在ACD發(fā)病過(guò)程中，Th1/Th2細(xì)胞及其之間的平衡發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，本文研究了銀杏酸對(duì)調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞平衡的相關(guān)基因表達(dá)的影響，包括Th1細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子干擾素γ（IFN-γ）

5、及其轉(zhuǎn)錄因子T-bet，Th2細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子白細(xì)胞介素4(IL-4)及其轉(zhuǎn)錄因子GATA-3，此外也研究了銀杏酸對(duì)細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）基因的影響。結(jié)果表明銀杏酸給藥組的干擾素γ(IFN-γ)、轉(zhuǎn)錄因子T-bet的基因表達(dá)量均低于模型組，而白細(xì)胞介素(IL-4)、轉(zhuǎn)錄因子GATA-3的基因表達(dá)量均高于模型組，說(shuō)明銀杏酸能影響Th1和Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，調(diào)節(jié)了Th1/Th2細(xì)胞之間的平衡，從而達(dá)到治