SEMA3B基因在胃癌組織和細胞中的甲基化及其表達模式的研究.pdf

1、背景:
　　胃癌是目前世界上第四大最常見的惡性腫瘤并且是第二大引起癌癥相關死亡的病因之一。盡管胃癌的診斷與治療水平在不斷提升，但是其預后仍較差。胃癌的發(fā)病機制極其復雜，涉及遺傳易感性、環(huán)境不良反饋、免疫調節(jié)失衡等多方面的因素，其中抑癌基因的甲基化失活在胃癌的發(fā)病中占有重要地位。
　　近年來發(fā)現(xiàn)，Semaphorins家族具有抗腫瘤活性，semaphorin3B(SEMA3B)作為Semaphorins家族的成員之一，在非小細

2、胞型肺癌、肝癌、膽管癌和人HEY卵巢癌細胞系中表現(xiàn)出抗癌作用，但是經(jīng)甲基化作用而失活。SEMA3B基因的甲基化作用在胃癌中的意義還有待進一步的研究。
　　目的:
　　本實驗旨在人胃癌細胞系（AGS，BGC-823，MGC-803和SGC-7901）和人胃癌組織臨床樣本的基礎上，觀察SEMA3B基因在胃癌中的表達狀態(tài)，初步探討其表達異常與甲基化的關系，并闡明可能的作用機制。
　　方法:
　　1.收集30例初治，未經(jīng)

3、藥物治療的胃癌患者術后標本，并相應取的癌旁正常組織。通過實時熒光定量PCR技術，評價SEMA3B基因在配對樣本中的表達情況，并關聯(lián)臨床病理參數(shù)以分析可能出現(xiàn)的陽性結果。
　　2.在人胃癌細胞系（AGS，BGC-823，MGC-803和SGC-7901）的基礎上，探討經(jīng)去甲基化劑5-氮-2'-脫氧胞苷處理后，SEMA3B基因和p53基因的表達情況。采用MethPrimer在線軟件，預測SEMA3B全段基因的CpG島分布，設計目標序列

4、的甲基化引物。同時應用亞硫酸氫鹽測序法(BSP)觀察SEMA3B基因18號外顯子的甲基化狀態(tài)，討論SEMA3B基因表達改變的可能機制。
　　3.應用生物信息學技術，通過Agilent Literature Search Software生成SEMA3B基因的作用網(wǎng)絡，闡明SEMA3B基因與受體類似物VEGF及其受體Nrp之間的關系，為將來的研究提供方向。
　　結果:
　　1.SEMA3B基因的mRNA水平在胃癌組織中是

5、降低的。而且SEMA3B基因的表達下調與胃癌的腫瘤大小和腫瘤N-分期相關。
　　2.5-氮-2'-脫氧胞苷能夠基于不同的作用時間和濃度，逆轉SEMA3B基因在胃癌細胞系（AGS，BGC-823，MGC-803和SGC-7901）中mRNA和蛋白的表達水平。p53基因在5-氮-2'-脫氧胞苷處理后的AGS，BGC-823，MGC-803胃癌細胞系中其mRNA的表達上升，且在后二者中的變化中有統(tǒng)計學差異，但是p53基因在SGC-790

6、1中的表達是降低的。
　　3.SEMA3B基因18號外顯子在AGS，BGC-823，MGC-803和SGC-7901胃癌細胞系中呈高度甲基化狀態(tài)，經(jīng)5-氮-2'-脫氧胞苷處理5天后，均有不同程度的去甲基化表現(xiàn)。進一步對胃癌組織的臨床標本及其配對正常胃粘膜組織的研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織（15例）的SEMA3B基因18號外顯子的甲基化率與正常胃粘膜組織相比是升高的(p＜0.05)。
　　4.利用Agilent Literature S

7、earch Software，引入“Sema3b，p53，neuropilins，vascular endothelial growth factor, cancer”等檢索詞，一共納入20篇文獻，構建的SEMA3B基因作用網(wǎng)絡圖清晰的指出了SEMA3B基因是通過mmp2蛋白與vegfa和p53起作用的。
　　結論:
　　SEMA3B基因在胃癌中表達降低，這與其基因甲基化失活有關。5-Aza-2'-deoxycytidine