青島市櫻花品種的酯酶同工酶及RAPD分析.pdf

1、本試驗利用酯酶同工酶及RAPD技術(shù)對青島市19個櫻花品種進行親緣關(guān)系鑒定和品種分類研究。以一年生枝的樹皮為材料進行了19個櫻花品種的酯酶同工酶研究。為確保櫻花RAPD反應的穩(wěn)定性和重復性，本研究對基因組DNA的提取方法和RAPD反應體系中MgCl<,2>濃度、dNTPs濃度、Taq酶用量、引物濃度、模板DNA濃度、退火溫度、PCR循環(huán)次數(shù)等影響擴增結(jié)果的重要因素進行了優(yōu)化。利用優(yōu)化的反應體系從60條隨機引物中篩選出32條，然后進行二次篩

2、選用于聚類分析，建立了UPGAM系統(tǒng)聚類圖。試驗主要得到以下結(jié)論： (1)青島市19個櫻花品種的酯酶同工酶酶譜共有12條酶帶，其中P<,7>為基本酶帶，活性強，為所有供試品種所具有；其他譜帶在各品種間存在缺省情況。 (2)青島市櫻花EST同工酶酶譜的系統(tǒng)聚類分析結(jié)果與形態(tài)學結(jié)果基本一致，證明了種源、重瓣性和花色可作為品種分類的重要指標，有較好的穩(wěn)定性。 (3)適于櫻花基因組DNA提取的方法為改良的CTAB法。

3、 (4)適于櫻花RAPD擴增的最優(yōu)反應體系為：20ul總反應體系中，1×PCR buffer，2.5 mmol/L MgCl<,2>，0.15 mmol/L dNTP，1U Taq酶，0.2umol/L 10bp隨機引物，20～30ng模板DNA。最佳擴增程序：94℃預變性4min，94℃變性30s，38℃退火30s，72℃延伸2min，循環(huán)40次，最后72℃延伸10min，12℃保存。 (5)從60條S系列隨機引物中篩選出

4、32條擴增效果較好的引物用于19個櫻花品種的RAPD擴增。32條引物共擴增出了533條帶，其中多態(tài)性帶為406條，多態(tài)率達76.17％。平均每個引物擴增出16條帶，s8和s107最多可達到21條。 (6)RAPD分析所得聚類圖將19個櫻花品種分為2大類群，第1類群主要為雜交櫻系；第2類群根據(jù)花的重瓣性、枝姿和花色又可分為2個亞類群和3類。證明了櫻花的種源、重瓣性、枝姿和花色都可作為資源調(diào)查和品種分類的重要指標。研究結(jié)果與以前形態(tài)