易感基因核苷酸多態(tài)性對中國漢族男性精子發(fā)生障礙的影響.pdf

1、目的：非梗阻性無精子癥(non-obstructive azoopsermia,NOA)是男性不育中最嚴重的一種表型，表現(xiàn)為精子發(fā)生過程阻滯。根據(jù)前人的研究和基因敲除小鼠模型，挑選出在精子發(fā)生過程中具有重要作用的五個候選基因：環(huán)指蛋白8(ring finger protein8,RNF8)，溴結(jié)構(gòu)域睪丸特有基因(bromodomain testis-specific,BRDT)，上游轉(zhuǎn)錄因子1(upstreamtranscription

2、factor1,USF1)，通用轉(zhuǎn)錄因子IIA1類似基因(generaltranscriptionfactor IIA,1like,GTF2A1L)和嗅覺感受器家族2亞家族3(olfactory receptor，family2，subfamily W,member3,OR2W3)。然后通過測序分別探討RNF8，BRDT，USF1，GTF2A1L和OR2W3這五個精子發(fā)生相關(guān)基因23個標簽單核苷酸多態(tài)性(single nucleotid

3、e polymorphism,SNP)位點的最小等位基因頻率(minor allele frequency,MAF)、基因型頻率以及單倍型頻率與中國漢族男性非梗阻性無精子癥間的易感性關(guān)系，并分析這些位點在NOA組中是否與臨床資料（睪丸大小和卵泡刺激素水平）有關(guān)，以此探究中國漢族男性不育潛在的遺傳發(fā)病機制。
　　方法：收集361例中國漢族男性非梗阻性無精子癥患者和368例中國漢族男性正常生育者的全血標本分別作為實驗組和對照組，根據(jù)D

4、NA提取試劑盒(QIAGEN)使用說明書，提取全血標本基因組DNA，利用Sequenom MassArray質(zhì)譜測序技術(shù)對RNF8基因9個標簽單核苷酸多態(tài)位點(rs104669,rs195379,rs195434,rs2284922,rs2284924,rs9380661,rs2269058,rs195432,rs169005)，BRDT基因5個標簽單核苷酸多態(tài)性位點(rs10783071,rs1156281,rs11165906,rs

5、2183036,rs17576636)，USF1基因3個標簽單核苷酸多態(tài)性位點(rs2516838,rs1556259,rs2774276)，GTF2A1L基因4個標簽單核苷酸多態(tài)性位點(rs1916838,rs11677854,rs10432667,rs13024367)和OR2W3基因2個標簽單核苷酸多態(tài)性位點(rs10888267,rs11204546)進行基因型測序。應(yīng)用Plink1.07軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進行統(tǒng)計分析，比較實驗組和

6、對照組間各標簽單核苷酸多態(tài)性位點最小等位基因的差異，并利用Haploview軟件對基因進行單倍型分析、利用SPASS軟件比較位點基因型與臨床資料(睪丸大小和卵泡刺激素)間的關(guān)系。
　　結(jié)果：RNF8基因rs104669和USF1基因rs2516838位點最小等位基因頻率在實驗組和對照組間顯示有顯著性差異(p=0.038,OR=1.326;p=0.020,OR=1.436)。單倍型分析顯示，RNF8基因單倍型AC(rs104669,

7、rs195432)可以減低無精子癥的發(fā)生(p=0.0428,OR=0.075)；單倍型TC(rs104669,rs195432)、單倍型ATCATCTCT(rs2269058,rs2284924,rs9830661,rs169005,rs195379,rs2284922,rs104669,rs195432,rs195434)和TCATCTC(rs2284924,rs9830661,rs169005,rs195379,rs2284922,

8、rs104669,rs195432)增加罹患NOA風(fēng)險(p=0.0031,OR=1.693;p=0.0086,OR=4.502;p=0.0085,OR=1.630)；USF1基因單倍型TCG(rs1556259,rs2516838,rs2774276)增加罹患NOA風(fēng)險(p=0.019,OR=1.436)。位點基因型與臨床資料相關(guān)性分析顯示，RNF8基因rs195432,rs196534和rs2284922基因型與睪丸大小有關(guān)(p=0.

9、030;p=0.025;p=0.034)；OR2W3基因rs11204546基因型、GTF2A1L基因rs11677854基因型與卵泡刺激素水平(follicle-stimulating hormone,FSH)有關(guān)(p=0.004;p=0.018)。
　　結(jié)論：RNF8基因rs104669和USF1基因rs2516838位點多態(tài)性可能與中國男性非梗阻性無精子癥有關(guān)。同時，在臨床參數(shù)上，RNF8基因rs1556259,rs2516