孕早期高雌激素暴露出生低體重-小于胎齡兒的表遺傳調(diào)節(jié)機制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行了闡述。
　　第一部分低出生體重/小于胎齡兒與妊娠早期血清雌激素水平。
　　目的:
　　評估多胎妊娠早期減為單胎或雙胎妊娠后的出生體重情況，并且比較分析早期多胎妊娠與單胎妊娠母親外周血雌激素水平及妊娠早期母親外周血雌激素水平與新生兒出生體重的關(guān)系。
　　材料和方法:
　　對2006年1月至2010年7月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院進行輔助生殖技術(shù)（Assisted reproducti

2、ve technology，ART）治療的病例進行回顧性分析，以自然或人為減為單胎妊娠或雙胎妊娠的減胎組為實驗組，以同期相應(yīng)的未進行減胎的原始雙胎或單胎作為對照組，比較分析實驗組單胎和雙胎與各自相應(yīng)對照組間新生兒出生體重和小于胎齡兒發(fā)生率之間的差異。同時收集195例ART后妊娠7-8周時母親的外周血（包括單胎、雙胎、三胎和四胎妊娠），利用化學(xué)發(fā)光法對外周血血清雌二醇水平進行檢測，比較各組間雌二醇水平，分析妊娠早期母親外周血雌激素水平與減

3、胎術(shù)后出生子代體重的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.多胎妊娠無論是減為單胎妊娠還是雙胎妊娠，減胎組新生兒平均出生體重均低于相應(yīng)的未進行減胎的原始單胎妊娠和雙胎妊娠組，單胎組分別為3217.05±546.88g和3377.85±477.05g，P＜0.01;雙胎組分別為2428.80±485.64g和2495.31±520.06g，P＜0.05。小于胎齡兒發(fā)生率前者均顯著高于后者，單胎組分別為2.9％(6/210)和11.4％(

4、12/105)，P＜0.01;雙胎組分別為27.3％(472/1728)和38.5％(167/434)，P＜0.01，早產(chǎn)的發(fā)生率均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　2.多胎妊娠組母親外周血雌二醇水平顯著高于單胎妊娠組，并且隨著妊娠胎數(shù)的增加，外周血雌二醇水平顯著升高(P＜0.01)。
　　3.妊娠早期母親外周血雌二醇水平與多胎妊娠減胎術(shù)后胎兒出生體重存在負性相關(guān)性（r=-0.32，P=0.018）。
　　結(jié)論:

5、r>　　處于高雌激素環(huán)境的早期多胎妊娠能增加子代低體重和小于胎齡兒發(fā)生率，并且這種影響不能利用早期減胎術(shù)進行消除，而妊娠早期母親外周血高雌激素水平可能在低出生體重和小于胎齡兒的發(fā)生中起著重要作用。
　　第二部分早期妊娠胎兒組織及子代出生后臍血和胎盤組織中印記基因的表達及調(diào)控機制。
　　目的:
　　評估多胎妊娠早期胎兒組織及子代出生后臍血和胎盤組織表觀遺傳學(xué)狀態(tài)。
　　材料和方法:
　　對多胎妊娠行早期減胎術(shù)

6、后獲得的胎兒組織與同期同孕周自然單胎妊娠行人工流產(chǎn)獲得的胎兒組織，以及減胎術(shù)后出生的雙胎臍血及胎盤組織與相應(yīng)的未進行減胎的雙胎臍血及胎盤組織進行對比研究，利用熒光定量PCR對印記基因IGF2、H19、PHLDA2和CDKN1C，及甲基化轉(zhuǎn)移酶DNMT1的表達水平進行檢測、利用甲基化特異性PCR及亞硫氫酸鹽測序的方法對上述印記基因相應(yīng)的差異甲基化區(qū)域H19 DMR和KvDMR1的甲基化水平進行檢測。
　　結(jié)果:
　　CDKN1

7、C和DNMT1不僅在多胎妊娠早期的胎兒組織中高表達，而且同時在減胎術(shù)后出生的雙胎臍血和胎盤組織中的表達均顯著上升(P＜0.05)，同時，CDKN1C的甲基化調(diào)控區(qū)域KvDMR1的甲基化水平均顯著上升(P＜0.05)。IGF2在多胎妊娠早期的胎兒組織中表達上升，但其甲基化調(diào)控區(qū)H19 DMR的甲基化水平未發(fā)生顯著改變，H19和PHLDA2的表達在在多胎妊娠早期的胎兒組織中表達未發(fā)生顯著變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　妊

8、娠早期高水平的雌激素可能通過上調(diào)胎兒組織中DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶DNMT1的表達使KvDMR1的甲基化升高，使生長抑制性印記基因CDKN1C的表達上調(diào)，從而對胎兒的生長發(fā)育產(chǎn)生持續(xù)性影響，導(dǎo)致低出生體重和小于胎齡兒的發(fā)生，這可能是早期高雌激素水平使低出生體重和小于胎齡兒的發(fā)生率增加的重要調(diào)控機制之一。
　　第三部分雌激素對CDKN1C表達的表遺傳調(diào)控機制。
　　目的:
　　探討雌激素是否直接參與了CDKN1C的表達及其表遺

9、傳調(diào)控機制。
　　材料和方法:
　　1.體外實驗以人類滋養(yǎng)細胞系HTR-8為研究對象，通過不同濃度的雌激素和（或）同時加入雌激素受體阻斷劑、DNMT1小干擾RNA處理細胞，采用熒光定量PCR技術(shù)檢測細胞中CDKN1C和DNMT1的表達。
　　2.通過高濃度的雌激素處理HTR-8細胞，采用甲基化特異性PCR技術(shù)及亞硫氫酸鹽測序技術(shù)檢測高濃度雌激素刺激后細胞KvDMR1區(qū)域甲基化水平。
　　3.DNMT1 promo

10、tor-pGL-3重組質(zhì)粒構(gòu)建，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HTR-8細胞，培養(yǎng)后裂解細胞進行熒光素酶活性檢測。
　　4.利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)，檢測DNMT1啟動子區(qū)域雌激素反應(yīng)元件與雌激素受體的結(jié)合。
　　結(jié)果:
　　1.雌激素能夠明顯上調(diào)DNMT1和CDKN1C的表達，使KvDMR1區(qū)甲基化水平上調(diào);雌激素受體阻斷劑ICI182780及DNMT1小干擾RNA能夠阻斷E2對CDKN1C的上調(diào)作用。
　　2.DNMT1轉(zhuǎn)錄起始

11、位點-659/-647 bp處存在雌激素反應(yīng)元件結(jié)構(gòu)，在HTR-8細胞中，E2可能通過該雌激素反應(yīng)元件調(diào)節(jié)DNMT1的表達，從而對CDKN1C的表達起到間接調(diào)控作用。
　　結(jié)論：
　　雌激素通過作用于DNMT1轉(zhuǎn)錄起始位點-659/-647 bp處的雌激素反應(yīng)元件使KvDMR1的甲基化升高，從而使生長抑制性印記基因CDKN1C的表達上調(diào)，這可能是孕早期高水平的雌激素對胎兒的生長發(fā)育產(chǎn)生持續(xù)性影響，導(dǎo)致低出生體重和小于胎齡兒的