基于不同層次的復(fù)方鱉甲軟肝片藥效物質(zhì)辨識及相關(guān)問題探討.pdf

1、藥效物質(zhì)辨識是中藥現(xiàn)代化研究的年要基石?？陀^辨識中藥藥效組分，對于闡明藥效作用機(jī)制，提高中藥質(zhì)量控制水平，保障臨床有效性和安全性提供重要的科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支撐，同時也為現(xiàn)代組分中藥的開發(fā)奠定堅實的基礎(chǔ)。由于中藥復(fù)方本身的復(fù)雜性、研究方法的局限性，中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)辨識尚未取得實質(zhì)性突破。
　　為尋求中藥藥效物質(zhì)辨識瓶頸的新突破，本課題以臨床首選治療肝纖維化藥物——復(fù)方鱉甲軟肝片為模式藥，探索建立新途徑：借鑒血清藥物化學(xué)的思路，逐次檢

2、測體外樣本、動物以及臨床標(biāo)本中的藥源性成分，通過對比分析三者異同，初步確定能代表藥效的目標(biāo)成分。在此基礎(chǔ)上，嘗試構(gòu)建一種基于“體外—動物—人體”層層遞進(jìn)、面向臨床的藥效物質(zhì)篩選模式，旨在多快好省地尋找和確定中藥藥效物質(zhì)。主要結(jié)果與結(jié)論如下：
　?。ㄒ唬楸碚鲝?fù)方鱉甲軟肝片體外成分，建立其體外成分分析方法：采用HPLC法表征了人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、芍藥苷、連翹苷和阿魏酸等成分；采用UPLC-Q-TOF/MS法，共表征了可能

3、存在的38種化合物，包括：三萜皂苷類（如人參皂苷、黃芪皂苷）、單萜類（如芍藥苷類）、黃酮類（如芒柄花素）、苯乙醇苷類（連翹酯苷）、揮發(fā)油（如洋川芎內(nèi)酯）、有機(jī)酸（如沒食子酸）等。為復(fù)方鱉甲軟肝片的藥效物質(zhì)的篩選、質(zhì)量控制方法的建立、藥效作用機(jī)制的闡明等后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　（二）為進(jìn)一步篩選藥效物質(zhì)，前期研究在大鼠含藥標(biāo)本中檢得人參皂苷類、三七皂苷、芍藥苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素等13種原型成分；繼而借鑒代謝組學(xué)思路，采用UPLC

4、-Q-TOF/MS法，針對正常大鼠與肝纖維化模型大鼠含藥血漿進(jìn)行整體對比研究，同時基于GC/TOF-MS技術(shù)對二者內(nèi)源性代謝產(chǎn)物作了差異分析。PCA分析的得分圖顯示，兩組大鼠血漿中代謝物組能得以區(qū)分，提示藥源性成分在二者體內(nèi)的吸收、分布、代謝等過程存在差異，導(dǎo)致所篩選得出的藥效物質(zhì)也會存在差異。
　?。ㄈ橛行П苊鈴捏w外到體內(nèi)，從動物到人體的種屬差異障礙，更加科學(xué)準(zhǔn)確地辨識藥效物質(zhì)，本研究結(jié)合UPLC-TOF/MS與MS/MS法

5、對人體正常劑量服藥后所采集的血液與尿液樣本進(jìn)行初步檢測，結(jié)果顯示，只檢測到了芍藥苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮葡萄糖苷幾種成分。反觀用藥劑量、樣品處理方式、檢測分析手段等多方面因素，揭示現(xiàn)今血清藥化研究模式對于人體樣本的適用性問題，有待更進(jìn)一步開展全面、深入的研究。
　　縱觀以上結(jié)果發(fā)現(xiàn)：（1）所測得成分從體外、動物到人體依次減少，提示體外和動物層次所含有的成分不一定是復(fù)方鱉甲軟肝片抗人體肝纖維化的藥效物質(zhì)；（2）正常/模型大鼠含藥血漿

6、的差異提示更應(yīng)關(guān)注基于模型動物的藥效物質(zhì)的篩選；（3）臨床樣本的分析存在給藥劑量、樣品處理方法等問題；以上現(xiàn)象顯示了現(xiàn)今中藥血清藥物化學(xué)應(yīng)用于藥效物質(zhì)辨識存在的臨床相關(guān)性、可行性與普適性等局限，本文嘗試對其一一進(jìn)行了探討。
　　綜上所述，本文通過“體外—動物—人體”三位一體的藥效物質(zhì)篩選途徑，初步闡釋了復(fù)方鱉甲軟肝片可能的藥效物質(zhì)，從而為最終形成中藥藥效物質(zhì)辨識的新模式，提供研究基礎(chǔ)。同時，對課題反映的問題所進(jìn)行的探討與和提出的建